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长链非编码RNA TPTEP1在卵巢癌发生发展中的作用和机制研究

摘要研究背景:<br>  卵巢癌的死亡率在妇科肿瘤中排名最高。由于早期卵巢癌往往表现为非特异性胃肠道症状如腹痛、腹胀等且缺乏有效的筛查手段,因此诊断为卵巢癌的患者中III期或IV期的占比超过70%。肿瘤细胞减灭术辅助化疗(以铂类为基础)是卵巢癌中晚期患者的主要治疗方案。高复发率、高转移率、易耐药性等是晚期卵巢癌的特点,尽管近些年在卵巢癌治疗方面取得了较多进展,但对卵巢癌患者的远期预后改善欠佳。当今肿瘤分子生物学不断发展,我们需要结合其发展的新方法新技术应用到卵巢癌的早期诊断和治疗中。长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)参与包括卵巢癌在内的肿瘤增殖、调控细胞周期、肿瘤的体内生长、细胞迁移、侵袭、死亡、上皮-间质转化、体内转移、血管生成和细胞代谢等,都与癌症的特征有关。lncRNATPTEP1是一种新型的lncRNA。lncRNATPTEP1可与蛋白或miRNA相互发生作用,参与多种癌症的增殖和迁移,如肝细胞癌和非小细胞肺癌。然而,lncRNATPTEP1在卵巢癌中的作用和机制尚不明确。<br>  研究方法:<br>  通过GEPIA网站在线分析lncRNATPTEP1在正常卵巢组织和卵巢癌组织的表达情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)探索lncRNATPTEP1在安徽医科大学第一附属医院20对卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达量。通过荧光原位杂交技术(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)检测lncRNATPTEP1在卵巢癌细胞中的主要定位。通过克隆形成实验、Edu、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、裸鼠皮下成瘤实验、免疫组化研究lncRNATPTEP1与卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移等功能的相关性。RNApull-down及RIP实验探索lncRNATPTEP1的结合蛋白。通过转录组测序富集分析及蛋白免疫印迹实验(WesternBlot,WB)验证lncRNATPTEP1在卵巢癌细胞中与PI3K/AKT信号通路的关联。<br>  研究结果:<br>  1)通过GEPIA网站在线验证lncRNATPTEP1在卵巢癌组织中表达下调,qRT-PCR在安徽医科大学第一附属医院20对卵巢癌组织和正常卵巢组织中进一步证实该结果,卡方检验分析结果显示低表达的lncRNATPTEP1与卵巢癌患者较高的FIGO分期及恶性腹水有显著相关性;<br>  2)EdU和克隆形成实验结果显示lncRNATPTEP1抑制卵巢癌细胞的体外增殖;<br>  3)经过细胞划痕和Transwell实验的结果表明,lncRNATPTEP1能够抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭;<br>  4)FISH实验结果显示lncRNATPTEP1主要定位在卵巢癌细胞核,进一步通过RNApull-down及RIP实验发现lncRNATPTEP1与PTBP1相互作用;<br>  5)通过EdU、细胞划痕和Transwell实验,我们观察到lncRNATPTEP1可与PTBP1相互作用抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;<br>  6)WB实验结果显示lncRNATPTEP1与PTBP1相互作用抑制PI3K/AKT信号通路;<br>  7)裸鼠皮下移植瘤实验的结果表明,lncRNATPTEP1对体内瘤形成具有抑制作用。<br>  研究结论:<br>  lncRNATPTEP1在卵巢癌中低表达,主要定位在卵巢癌细胞核中,通过结合蛋白PTBP1调控PI3K/AKT信号通路的激活,进而影响卵巢癌的增殖、侵袭、迁移功能。

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