检索历史 清除

摘要GSDME蛋白是细胞焦亡的关键效应蛋白，许多研究表明GSDME诱导的细胞焦亡在肿瘤治疗中发挥重要的作用。焦亡作为一种高度免疫原性的细胞死亡形式，可以引起局部炎症并吸引炎症细胞浸润，在缓解肿瘤微环境的免疫抑制和诱导系统免疫反应中发挥了重要作用。肿瘤是一种多基因疾病，病因复杂，发病趋势逐渐年轻化，危害人类健康。随着科技的进步以及医学研究的逐步深入，肿瘤的治疗也越来越完善，常见的有手术治疗、化疗、放疗和免疫治疗等,其中放疗仍然是肿瘤治疗的十分重要疗法，细胞内caspase-3可以被放射线激活来切割活化GSDME引起细胞焦亡，促进吞噬细胞对肿瘤细胞的吞噬。本实验通过筛选高表达GSDME蛋白的细胞模型，经过X射线处理后，观察吞噬细胞对肿瘤细胞的吞噬情况的变化，探究X射线通过caspase3/GSDME信号通路诱导细胞焦亡与抗肿瘤免疫的关系。<br>　　目的:<br>　　筛选出高表达GSDME的肿瘤细胞，经过X射线辐照处理，确定诱导肿瘤细胞发生焦亡的最佳辐照条件，与吞噬细胞共同培养，观察处理前后肿瘤细胞被吞噬的情况，探究X射线通过caspase3/GSDME信号通路诱导细胞焦亡与抗肿瘤免疫的关系。<br>　　方法:<br>　　1、筛选出高表达GSDME的肿瘤细胞<br>　　实验将选择HCT116(人类结肠肿瘤细胞)、Hela(人类宫颈肿瘤细胞)和Ovcar8(人类卵巢细胞)在Westernblot方法下考察GSDME蛋白在不同细胞下的表达情况。<br>　　2、确定诱导肿瘤细胞发生焦亡的最佳条件<br>　　设置不同X射线辐照剂量和辐照时间，对肿瘤细胞进行处理，筛选出诱导肿瘤细胞发生焦亡的最佳辐照剂量和时间。<br>　　3、肿瘤细胞与吞噬细胞共同培养，观察吞噬情况<br>　　通过将处理组和对照组肿瘤细胞分别与吞噬细胞共同培养，肿瘤细胞通过荧光显微镜观察变化情况。<br>　　结果:<br>　　通过Westernblot分析，Hela细胞高表达GSDME蛋白，确定Hela细胞为本课题的肿瘤细胞，设置0Gy、2Gy、8Gy、15Gy剂量组，分别观察0h、48h、72h、96h时间点的细胞焦亡情况，研究结果发现，在辐照剂量8Gy下培养72h后的Hela细胞发生吹泡现象明显，通过caspase3/GSDME信号通路诱导焦亡情况最好，吞噬结果表明，经过辐照发生焦亡后的Hela细胞被M1巨噬细胞吞噬效果更好吞噬更多，抗肿瘤免疫效果更好。<br>　　结论:<br>　　1、8Gy剂量辐照后培养72h，Hela细胞镜下观察细胞吹泡明显，GSDME蛋白表达明显，发生焦亡明显；<br>　　2、将辐照过的Hela细胞（处理组）和未辐照的Hela细胞（对照组）与M1型巨噬细胞共同培养，处理组Hela细胞被吞噬更多，说明X射线通过caspase3-GSDME通路诱导肿瘤细胞发生焦亡促进了抗肿瘤免疫，可以为后续的肿瘤治疗提供了新的思路。