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摘要背景和目的<br>　　黑色素瘤（Melanoma）作为一种黑素细胞来源的高度恶性肿瘤，多发生于皮肤，也可见于黏膜和眼脉络膜等部位，其死亡率居皮肤癌之首。黑色素瘤的病因和发病机制尚不明确，可能与紫外线长期暴露、色素痣、家族史有关。目前针对黑色素瘤的治疗措施包括手术?化疗?放疗及免疫治疗等,但治疗效果欠佳,容易导致放射性?多重耐药性等副作用,给患者带来的经济负担也较高,现有治疗方式的局限性亟需新的黑色素瘤治疗策略。木犀草素(Luteolin,LUT)是一种天然黄酮类化合物,多以糖苷的形式存在于多种植物中。研究发现木犀草素具有多种药理活性,如抗过敏?抗炎?抗病毒?抗菌?抗肿瘤等。既往研究显示,木犀草素还有潜在的治疗黑色素瘤作用。然而,低水溶性和低生物利用度限制了木犀草素的临床应用。基于黑色素瘤细胞中的高活性氧（ROS）水平，我们利用ROS响应性材料聚（硫化丙烯）-聚（乙二醇）（PPS-PEG）开发了封装LUT的纳米颗粒，目的在于提高LUT的水溶性，加速LUT在黑素瘤细胞中的释放，进一步增强LUT的抗黑色素瘤效果，为LUT纳米递送系统在黑色素瘤治疗中的应用提供可行的解决方案。<br>　　方法<br>　　本研究以聚（硫化丙烯）-聚（乙二醇）（PPS-PEG）为载药材料制备了纳米颗粒（PPS-NPs），并将最终的载木犀草素纳米颗粒命名为LUT-PPS-NPs。同时研究还优化了制备工艺,以滴定-单乳化溶剂挥发法的制备途径获得载药率和包封量等性质更优的LUT-PPS-NPs。表征方面应用动态光散射(DLS)纳米粒度分析仪和透射电子显微镜(TEM)确定纳米颗粒的粒径和形态，利用体外释放研究以确定LUT-PPS-NPs的ROS响应性特征。之后进一步研究了SK-MEL-28人恶性黑色素细胞对LUT-PPS-NPs的摄取及摄取机制。通过CCK-8试验评估了纳米颗粒作用于人皮肤成纤维细胞(HSF)48h的细胞毒性和作用于SK-MEL-28人恶性黑色素瘤细胞24h及48h的细胞杀伤效果。通过细胞凋亡、细胞迁移、细胞侵袭实验以及低密度和正常密度细胞铺板的细胞增殖抑制实验来检测LUT-PPS-NPs的体外抗黑色素瘤作用。动物实验方面利用BALB/c裸鼠建立了移植黑色素瘤模型,通过瘤内注射LUT-PPS-NPs的给药方式观察黑色素瘤的生长情况，初步研究LUT-PPS-NPs的体内抑制黑色素瘤作用。<br>　　结果<br>　　使用优化的滴定-单乳化溶剂挥发法制备的LUT-PPS-NPs具有球形结构，尺寸为169.77±7.33nm,载药量为15.05±0.07%。体外释放结果显示LUT-PPS-NPs在高H2O2的环境下能有效地释放LUT,显示出ROS响应性以及良好的缓释性能。细胞摄取实验证实所制备的LUT-PPS-NPs能被SK-MEL-28黑色素瘤细胞有效内化。CCK-8结果表明24h给药情况下，LUT-PPS-NPs对SK-MEL-28黑色素瘤细胞的杀伤效果接近游离LUT。48h给药情况下，LUT-PPS-NPs对HSF细胞显示出较低的细胞毒性，在低浓度给药情况下对SK-MEL-28黑素瘤细胞具有较高的细胞杀伤作用。此外，与游离的LUT相比,LUT-PPS-NPs释放的LUT明显抑制了黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，同时促进了黑色素瘤细胞的凋亡。动物实验显示，与LUT给药组相比，LUT-PPS-NPs给药组对异种移植的黑色素瘤具有更强的生长抑制作用。<br>　　结论<br>　　本研究所制备的LUT-PPS-NPs,具有良好的水溶解性、稳定性及肿瘤部位聚集释放特性，在体内外均显著增强了LUT的抗黑色素瘤效果。