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养阴清肺汤加味调控SMPP小鼠免疫功能的机制研究

摘要目的:通过检测肺组织、脾组织及血清中免疫相关因子的动态变化,探究重症肺炎支原体肺炎(SMPP)小鼠体内免疫功能变化情况,将中医的养阴润燥解毒治法与T淋巴细胞CD4+%、CD8+%、CD4+/CD8+,免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)及相关转录因子B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1(Blimp1)、B细胞淋巴瘤因子6(Bcl6)、干扰素调节因子4(Irf4)及X框结合蛋白1(Xbp1)的表达变化相关联,探讨养阴清肺汤加味(YQDP)干预SMPP的靶点机制。<br>  材料与方法:将120只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、YQDP组、西药组及中西医结合组。除正常组外,各组小鼠用异氟烷麻醉后以浓度为1010CCU/ml的肺炎支原体(MP)菌液滴鼻构建SMPP模型,模型建立成功后开始进行药物干预,分别在第3、7、10、14天进行取材。观察小鼠的一般状态;计算小鼠肺指数;光镜下观察小鼠肺组织病理改变(HE染色),并计算其病理评分;流式细胞术检测脾组织中T淋巴细胞CD4+%、CD8+%、CD4+/CD8+的含量;qPCR法对肺组织中Blimp1、Bcl6、Irf4及Xbp1基因含量进行测定;Westernblot法检测小鼠肺组织Blimp1、Irf4及Xbp1的蛋白表达;ELISA法检测小鼠血清中免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的含量。<br>  结果:<br>  1.从小鼠的一般状态观察来看,模型建立后第7天,各组小鼠感染状态最为显著,出现竖毛、鼻腔分泌物增多、体质量下降等,第14天,模型组小鼠一般状态较前有所改善。<br>  2.比较各组小鼠肺指数发现,MP感染后模型组小鼠肺指数在各时间点均高于正常组,且于第7天达最高(P<0.05),而后逐渐降低。<br>  3.模型建立成功后,光镜下观察各组小鼠肺组织病理改变并比较其病理评分,发现感染后,小鼠肺泡结构遭到破坏,药物干预后,各组小鼠病理评分均低于模型组(P<0.05),且在第7天为最高。YQDP组在各时间点病理评分略低于西药组,但差异不显著(P>0.05)。给药10天后,各用药组肺组织病理结构呈损伤后修复状态,除第3天外,中西医结合组评分均低于YQDP组(P<0.05),至第14天,低于另两用药组(P<0.05)。<br>  4.通过流式细胞术法检测SMPP小鼠脾组织中T淋巴细胞CD4+%、CD8+%及CD4+/CD8+的含量发现,与正常组比较,MP感染后各时间点小鼠脾脏中CD4+%、CD4+/CD8+值降低(P<0.05),CD8+%升高(P<0.05),分别于第3天达到最低值及最高值。与模型组比较,用药后各时间点小鼠脾脏中CD4+%、CD4+/CD8+数值有所上升(P<0.05),CD8+%有不同程度下降(P<0.05);用药第10天,中西医结合组小鼠脾脏中CD4+%含量、CD4+/CD8+值均高于YQDP组及西药组(P<0.05),CD8+%含量则低于另两用药组(P<0.05);用药第14天,中西医结合组及YQDP组小鼠脾脏中CD4+%含量均多于西药组(P<0.05),中西医结合组小鼠脾脏中CD8+%含量低于YQDP组及西药组(P<0.05),CD4+/CD8+数值高于另两用药组(P<0.05),但仍略高于正常组(P<0.05)。<br>  5.比较各组小鼠肺组织中Blimp1、Bcl6、Irf4及Xbp1mRNA表达发现,MP感染后各组小鼠肺组织中Blimp1、Irf4、Xbp1mRNA的相对表达量均有不同程度提升(P<0.05),Bcl6mRNA则有所降低(P<0.05)。用药第7天,中西医结合组小鼠肺组织中Blimp1、Irf4、Xbp1mRNA相对表达量低于其他用药组(P<0.05),而其Bcl6mRNA的相对表达量高于西药组(P<0.05),西药组高于YQDP组(P<0.05);用药第10天,中西医结合组小鼠肺组织中Blimp1、Irf4、Xbp1mRNA相对表达量低于另两组(P<0.05),Bcl6mRNA相对表达量高于另两组(P<0.05),且另两组间差异不明显(P>0.05)。至用药第14天,中西医结合组小鼠肺组织中Blimp1、Xbp1mRNA的相对表达量略高于正常组,但差异不显著(P<0.05),Irf4mRNA表达量低于另两组但仍高于正常组(P<0.05),Bcl6mRNA表达高于另两组但仍低于正常组(P<0.05)。<br>  6.在MP感染后,观察各组小鼠肺组织中Blimp1、Irf4、Xbp1蛋白的表达发现,与正常组相比,感染后小鼠肺组织内Blimp1、Irf4、Xbp1蛋白表达均有所上升(P<0.05),用药后各组均出现不同程度下降(P<0.05)。至用药第10天,中西医结合组Blimp1、Irf4、Xbp1蛋白相对表达量降低程度略大于另两用药组(P<0.05);用药第14天,中西医结合组小鼠肺组织Blimp1、Xbp1蛋白表达量与正常组较为接近,差异不明显(P>0.05),Irf4蛋白表达仍略高于另两用药组(P<0.05)。<br>  7.比较各组小鼠血清中免疫球蛋白含量发现,与正常组比较,MP感染后各时间点小鼠血清中IgA、IgG、IgM均升高(P<0.05),分别于第3天、第10天和第3天达最高值;与模型组相比,用药后各时间点小鼠血清内IgA、IgG、IgM含量均出现下降(P<0.05);至用药第7天,YQDP组及中西医结合组小鼠血清IgA、IgM含量低于西药组(P<0.05);用药第10天,YQDP组及中西医结合组小鼠血清IgG含量低于西药组(P<0.05);用药14天后,各用药组小鼠血清中IgA、IgG、IgM含量均以中西医结合组更低(P<0.05),但仍略高于正常组。<br>  结论:<br>  1.SMPP模型建立后,小鼠体内出现T淋巴细胞CD4+%、CD4+/CD8+降低,CD8+%升高及免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的升高,表明SMPP小鼠体内存在细胞及体液免疫紊乱情况,为进一步探究中医药调控SMPP小鼠免疫功能的作用靶点提供研究基础。<br>  2.养阴清肺汤加味可以通过增加T淋巴细胞CD4+%、CD4+/CD8+,降低CD8+%及免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的表达以改善SMPP小鼠体内免疫紊乱情况,还可促进Blimp1、Xbp1、Irf4的表达,抑制Bcl6的产生以调节局部免疫环境,达到改善免疫功能的养阴润燥解毒的效果。

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导师 吴振起
发布时间 2023-11-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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