检索历史 清除

摘要目的：阐明以解毒通络保肾法为立方原则的消肾方是通过调控GRP78/ATF6/PUMA信号通路，干预内质网应激（ERS）引致的糖尿病肾脏疾病大鼠肾脏细胞凋亡，从而保护肾脏，延缓糖尿病肾脏疾病（DKD）进展的作用机制，揭示消肾方解毒通络保肾的科学内涵，为临床上使用解毒通络保肾法治疗DKD奠定理论基础。<br>　　方法：雄性SD大鼠适应性喂养5天，禁食不禁水12小时后，以一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的方式制备糖尿病（DM）大鼠模型，长期的高血糖将使其转变为DKD大鼠模型。随机分组为空白组、模型组、阳性组、消肾方低、中、高剂量组，对应给药干预，空白组和模型组以等体积蒸馏水作为对照。连续给药10周。定时称重、测尾尖血糖，监测饮水量和摄食量。10周后称重、麻醉、腹主动脉取血，分离血清，以全自动生化仪测定血糖代谢及肾功能指标；摘取双侧肾脏，称重后计算肾重系数，制作病理切片，以HE染色法观察肾脏细胞形态，TUNEL法观测凋亡情况，WesternBlot法测定ATF6、CHOP、GRP78、PUMA、CASPASE-3蛋白的表达水平。<br>　　结果：<br>　　（1）消肾方对DKD模型SD大鼠一般状态的影响：与空白组相比，模型组SD大鼠消瘦，被毛不洁，不喜活动，摄食、饮水量增加，垫料潮湿，部分大鼠叫声低微，挣扎无力。消肾方各剂量组及阳性组相对于模型组，随着给药干预进行，各方面状态均有改善。<br>　　（2）消肾方对DKD模型SD大鼠尾尖血糖值的影响：给药4周时，消肾方高剂量血糖控制优于阳性组，但差异没有统计学意义（P＞0.05）。给药8周时，消肾方高、中、低剂量组降低血糖力度均全面优于阳性对照组，且高剂量与模型组之间、阳性与高剂量组之间的差异有显著统计学意义（P＜0.01）。<br>　　（3）消肾方对DKD模型SD大鼠24h摄食量和饮水量的影响：摄食量方面，各给药组相比模型组，标准差（SD值）明显降低，平均值略有降低。饮水量方面，中高剂量与阳性组的差异有显著统计学意义（P＜0.01）。<br>　　（4）消肾方对DKD模型SD大鼠体重、肾重及肾重系数的影响：给药各组相比模型组，均能减轻体重减少，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。消肾方中、高剂量组肾重系数相比于模型组明显降低，消肾方高剂量组与阳性组的肾重系数差异有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　（5）消肾方对DKD模型SD大鼠肾功能及糖代谢的影响：消肾方低、中、高剂量组相对于模型组，均能降低尿素氮水平，消肾方中、高剂量组间的差异有显著统计学意义（P＜0.01）。阳性组和高剂量组均能明显降低血肌酐水平，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。给药各组均能够降低血糖，差异均有统计学意义（P＜0.05），消肾方中、高剂量给药组血糖平均水平低于阳性组。糖化血红蛋白方面，消肾方高、中、低剂量组全面优于阳性组，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。<br>　　（6）消肾方对DKD模型SD大鼠肾脏形态的影响：与空白组相比，模型组肾脏损伤评分显著升高，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。与模型组相比，消肾方低、中、高剂量组可以明显降低肾脏损伤评分，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。病理切片HE染色见：空白组基本正常；模型组可见多处变性改变存在，肾脏损伤评分明显升高，肾损伤模型成立，各给药组肾脏损伤程度均有所减轻。<br>　　（7）消肾方对DKD模型SD大鼠ERS导致的细胞凋亡相关蛋白表达的影响：相对于模型组，各给药组ATF-6表达均有所降低，差异具有统计学意义（P＜0.05），消肾方全剂量浓度干预下的ATF-6相对表达量低于阳性组，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。相对模型组，各给药组均降低CHOP的表达量，差异均有统计学意义，消肾方中低剂量在改善CHOP相对表达量平均水平上不及阳性组。对于GRP78，相对于模型组，各给药组均能降低其相对表达水平，差异具有统计学意义（P＜0.01），消肾方高、中剂量优于阳性组。对于PUMA的表达，给药各组与模型组之间的差异均有显著统计学意义（P＜0.01）。消肾方改善其平均表达水平在中、高剂量时优于阳性组，差异有统计学差异（P＜0.05）。对于CASPASE-3，与模型组比较，消肾方中、高剂量组的差异均有显著统计学意义（P＜0.01）；消肾方高剂量组对比阳性组，其差异有统计学意义（P＜0.05）。<br>　　（8）消肾方对DKD模型SD大鼠肾脏细胞凋亡指数的影响：与模型组相比，消肾方低、中、高剂量组肾脏凋亡指数有基于量效程度的降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。凋亡染色切片见：空白组肾脏基本正常；模型组肾间质细胞凋亡发生比例较高；阳性药物组中，肾脏内凋亡细胞数量降低。比较模型组，消肾方中、高剂量组明显减少凋亡细胞数量的发生，低剂量组效果弱于高中剂量组。<br>　　结论：<br>　　（1）消肾方能够改善DKD模型SD大鼠病理表现<br>　　消肾方给药能有效改善DKD模型SD大鼠摄食饮水量增多，体重减轻的“消渴”状态，降低血糖值，保护肾功能，减轻肾脏组织病理性损伤，降低肾重系数，改善疾病状态，延缓DKD进展，药效与剂量呈现正比关系。<br>　　（2）消肾方可以减少ERS导致的肾脏实质细胞凋亡<br>　　消肾方给药能够改善DKD模型SD大鼠病理表现，减少肾脏细胞凋亡，保护肾脏，从而抑制DKD进展，可能与其减少了其肾脏组织内ATF6、CHOP、GRP78、PUMA、CASPASE-3蛋白的表达水平，抑制相关信号通路活化介导的ERS引致的细胞凋亡有关。