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摘要【目的】<br>　　1.研究PARP1、Foxo3a和LINC01480在急性髓系白血病中的表达及相关性分析。<br>　　2.探讨LINC01480在氢醌诱导TK6细胞凋亡中的作用及调控机制。<br>　　3.研究金银花提取物通过调控LINC01480在急性髓系白血病及氢醌诱导的细胞毒性中的干预作用。<br>　　【方法】<br>　　1.利用实时荧光定量PCR和Westernblotting检测急性髓系白血病病人的骨髓样本以及急性髓系白血病细胞中PARP1、Foxo3a和LINC01480的表达水平，并利用Spearman相关性分析分析三者之间的相关性。<br>　　2.染色质免疫共沉淀实验：Foxo3a、Smad3以及ZEB1的特异性抗体与超声后交联的染色质进行共孵育，蛋白质-DNA复合物的洗脱，DNA的释放及纯化后进行PCR检测，将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，鉴定特异性的Foxo3a、Smad3以及ZEB1的抗体能否富集LINC01480的启动子区。<br>　　3.双荧光素酶报告基因测定：构建野生型和突变型LINC01480表达质粒以及Foxo3a和Smad3过表达质粒，利用Lipofectamine2000转染试剂将质粒转染至HEK293细胞，48h后，采用双荧光素酶报告基因系统检测荧光强度。<br>　　4.通过慢病毒技术构建LINC01480和Foxo3a缺陷及过表达的TK6细胞，用嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株。<br>　　5.细胞免疫荧光以及核质分离实验检测氢醌染毒后PARP1、Foxo3a、Smad3在细胞中的定位及表达。<br>　　6.分别用0μM、5μM、10μM和20μM氢醌染毒TK6细胞12h、24h、48h和72h，qRT-PCR检测LINC01480的表达，流式细胞仪检测细胞凋亡，CCK-8检测细胞相对存活率，Westernblotting检测蛋白的表达水平。<br>　　7.利用PI3K/AKT信号通路的抑制剂LY294002和激活剂SC79来抑制或激活PI3K/AKT信号通路，研究该通路在氢醌诱导的细胞凋亡中的作用。<br>　　8.利用不同浓度发金银花提取物处理急性髓系白血病细胞以及氢醌染毒的TK6细胞，研究金银花的干预效果。<br>　　9.统计学方法：所有结果均以三次独立实验的均数±标准差（SD）表示。实验组和对照组之间的差异用Student’st-test分析。多组比较采用单因素方差分析和Tukey’sHSD事后检验。使用GraphPadPrism8软件进行作图和统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。<br>　　【结果】<br>　　1.PARP1、Foxo3a和LINC01480在急性髓系白血病中的表达及相关性分析<br>　　通过TCGA数据库分析发现，在急性髓系白血病中，LINC01480和Foxo3a均为高表达，PARP1呈现低表达，且LINC01480高表达与不良预后相关。相关性分析发现，PARP1与LINC01480、Foxo3a以及Foxo3a与LINC01480的表达均呈正相关。此外，PARP1、Foxo3a和LINC01480在THP-1和KG-1细胞中高表达，在U937细胞中低表达。LINC01480在三株急性髓系白血病细胞中主要定位于细胞核。PARP1、Foxo3a、LINC01480的mRNA表达水平在骨髓样本中均下调，PARP1和Foxo3a的表达呈正相关。<br>　　2.LINC01480在氢醌诱导TK6细胞凋亡中的作用及调控机制<br>　　2.1PARP1通过调控转录因子Foxo3a促进LINC01480的转录<br>　　在TK6细胞中，PARP1可能通过核糖基化修饰作用促进Foxo3a的去磷酸化，去磷酸化的Foxo3a入核，并增强了其与INC01480的启动子区相结合，从而促进LINC01480的转录。<br>　　2.2LINC01480通过抑制PI3K/AKT信号通路促进氢醌诱导的TK6细胞凋亡<br>　　氢醌通过影响PARP1和Foxo3a的表达及定位促进LINC01480的表达，进而诱导细胞凋亡。同时，氢醌抑制PI3K/AKT信号通路的激活，激活该通路可逆转氢醌诱导的TK6细胞凋亡。LINC01480负调控PI3K/AKT通路，高表达的LINC01480促进氢醌诱导的细胞凋亡部分依赖于PI3K/AKT信号通路的抑制。<br>　　3.金银花提取物通过调控LINC01480在急性髓系白血病及氢醌诱导的细胞毒性中的干预作用<br>　　3.1金银花提取物通过促进PARP1、Foxo3a和LINC01480的表达，抑制PI3K/AKT信号通路的激活，引起急性髓系白血病细胞的凋亡。<br>　　3.2金银花提取物及其活性成分绿原酸通过抑制PARP1、Foxo3a和LINC01480的表达，促进PI3K/AKT信号通路的激活，对氢醌诱导的细胞毒性发挥保护作用。<br>　　【结论】<br>　　1.在急性髓系白血病中，PARP1和Foxo3a的表达呈正相关，LINC01480高表达的患者可能预后不良。<br>　　2.PARP1可能通过影响Foxo3a的磷酸化水平，进而增强了转录因子Foxo3a与LINC01480启动子区结合，促进LINC01480的转录。高表达的LINC01480通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活促进氢醌诱导的细胞凋亡。<br>　　3.金银花提取物可能通过调控LINC01480的表达，促进急性髓系白血病细胞的凋亡，同时对氢醌诱导的细胞毒性发挥保护作用。LINC01480可能是急性髓系白血病和氢醌诱导的血液毒性的干预靶点。