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摘要目的：<br>　　探讨卵巢癌中的差异lncRNA对卵巢癌的EMT调控机制，本研究选择5例卵巢癌、5例正常卵巢组织，采用高通量测序筛选出差异表达的lncRNAs，利用生物信息学方法进行分析与EMT相关的lncRNAs，并预测其下游机制。在卵巢癌组织验证表达，以及细胞、动物水平验证其恶性肿瘤功能。根据生信分析来预测靶分子lncRNA下游的miRNA，推断lncRNA可能通过吸附miRNA调控下游靶基因而促进EMT在卵巢癌的恶性进展中发挥重要作用。<br>　　方法：<br>　　1．高通量测序检测5例卵巢癌组织和5例正常卵巢组织中差异表达的lncRNAs，运用生物信息分析，与TCGA卵巢癌患者的整体生存相关（hazardratio＞1or＜1），发现卵巢癌中EMT相关通路被激活，与卵巢癌的发生发展密切相关。qPCR分析EMT相关这5个lncRNAs在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达情况，以及卵巢癌细胞系中表达情况。<br>　　2．将lncRNAAC005224.4过表达质粒、干扰序列瞬时转染至卵巢癌细胞SKOV3和CAOV-3，通过CCK-8实验检测卵巢癌细胞增殖能力、Tranwell迁移实验检测迁移能力、Tranwell侵袭实验检测侵袭能力。WesternBlot检测EMT相关蛋白的表达来明确lncRNAAC005224.4表达水平变化对卵巢癌细胞系恶性生物学功能的影响。<br>　　3．构建裸鼠异位移植瘤模型，用慢病毒Lv-si-NC（对照慢病毒），Lv-si-AC005224.4（干扰慢病毒）分别感染SKOV3细胞，细胞接种于小鼠腋下，随着时间推移逐步生产成肿瘤，进行瘤体体积检测、瘤体重量检测。检测干扰lncRNAAC005224.4对瘤体中EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Snail和Vimentin）的影响。<br>　　4．从我们的高通量筛选和TCGA同时筛选共表达基因，发现lncRNAAC005224.4与EMT重要转录因子如SNAI2。结合starBasev3.0、HMDDv3.0和TargetScanRelease7.2数据库，分别得到lncRNAAC005224.4靶向的miRNAs、卵巢癌疾病相关miRNAs和SNAI2基因靶向的miRNAs，三者取交集，得到7个miRNA：hsa-miR-98、hsa-let-7g、hsa-let-7a、hsa-let-7b、hsa-let-7c、hsa-let-7f、hsa-miR-140-3p。qPCR检测上述7个miRNA、SNAI2在卵巢癌组织中的表达，q-PCR检测miR-140-3p、SNAI2在卵巢癌细胞株的表达。双荧光素酶实验检测lncRNAAC005224.4与miR-140-3p、miR-140-3p与SNAI2的靶向结合；检测并分析lncRNAAC005224.4表达变化对miR-140-3p、SNAI2的影响；检测miR-140-3p表达变化对SNAI2的影响；WesternBlot检测miR-140-3p、SNAI2表达变化对EMT相关蛋白表达的影响。<br>　　结果：<br>　　1．本研究应用高通量测序技术，对5例卵巢癌组织和5例正常卵巢组织进行lncRNA测序分析，我们筛选得到lncRNAs差异表达（log2FC＞1，P＜0.05），与TCGA卵巢癌患者的整体生存相关（hazardratio＞1or＜1），发现卵巢癌中EMT相关5个lncRNA：AC005224.4、AC009093.2、UG0898H09、AC015912.3和AL139081.1。运用qPCR检测lncRNAAC005224.4在卵巢组织和卵巢癌细胞系中均高表达。<br>　　2．CCK-8实验结果显示：在SKOV3和CAOV-3细胞系中过表达lncRNAAC005224.4可促进卵巢癌细胞增殖，干扰lncRNAAC005224.4可抑制卵巢癌细胞增殖。Transwell迁移实验结果表明：在SKOV3和CAOV-3细胞系中过表达lncRNAAC005224.4可促进卵巢癌细胞迁移，干扰lncRNAAC005224.4可抑制卵巢癌细胞迁移。Transwell侵袭实验结果表明：在SKOV3和CAOV-3细胞系中过表达lncRNAAC005224.4可促进卵巢癌细胞侵袭，干扰lncRNAAC005224.4可抑制卵巢癌细胞侵袭。在SKOV3和CAOV-3细胞系过表达lncRNAAC005224.4可抑制卵巢癌细胞中E-cadherin的表达，促进N-cadherin、Snail和Vimentin的表达；干扰lncRNAAC005224.4可促进卵巢癌细胞中E-cadherin的表达，抑制N-cadherin、Snail和Vimentin的表达。<br>　　3．构建裸鼠异位移植瘤模型，Lv-si-AC005224.4（干扰慢病毒）组，瘤体体积、瘤体重量检测显著小于对照组。瘤体中WB结果显示：Lv-si-AC005224.4组相较于Lv-si-NC组肿瘤中E-cadherin表达水平显著上调，N-cadherin、Snail和Vimentin表达水平显著下调。<br>　　4．miR-140-3p在卵巢癌组织以及卵巢癌细胞中表达最低。与正常卵巢组织相比，SNAI2在卵巢癌组织中高表达。过表达lncRNAAC005224.4抑制SKOV3细胞中miR-140-3p表达，干扰lncRNAAC005224.4促进SKOV3细胞中miR-140-3p的表达。过表达miR-140-3p可抑制巢癌细胞中SNAI2的表达，下调miR-140-3p可促进卵巢癌细胞中SNAI2的表达。双荧光素酶实验证实lncRNAAC005224.4与miR-140-3p存在相互作用位点，miR-140-3p与SNAI2的3’-UTR区存在靶向作用位点。过表达miR-140-3p可促进卵巢癌细胞中E-cadherin的表达，抑制N-cadherin、Snail和Vimentin的表达；过表达SNAI2可抑制卵巢癌细胞中E-cadherin的表达，促进N-cadherin、Snail和Vimentin的表达。<br>　　结论：<br>　　1．通过对卵巢癌组织和正常卵巢组织高通量测序结合生信分析，发现了与EMT相关的差异表达的lncRNAs，其中lncRNAAC005224.4在卵巢癌组织以及细胞中高表。<br>　　2．lncRNAAC005224.4促进卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移，促进卵巢癌细胞EMT过程。<br>　　3．抑制lncRNAAC005224.4的表达在动物水平起到抑制肿瘤增殖，抑制移植瘤卵巢癌组织的EMT相关蛋白表达。<br>　　4．lncRNAAC005224.4/miR-140-3p/SNAI2调控轴通过EMT促进卵巢癌侵袭转移。