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摘要近年来，艰难梭菌相关性腹泻（Clostridium Difficile Associated Diarrhea, CDAD）的患病率越来越高，复发和重症患者大幅增多，对公共健康造成严重威胁，且现阶段临床治疗方案均有缺陷，亟需新的治疗方案和替代药物。传统中药“生姜泻心汤”（Shengjiangxiexin Tang, SJT）始载于《伤寒论》，方中包括生姜、甘草、人参、干姜、黄芩、半夏、黄连、大枣 8 味中药组成，是治疗“泄泻”的经典方剂，在实际治疗中被广泛应用。我们在前期研究中应用SJT 作为CDAD 的辅助治疗药物，发现其具有显著的疗效。然而，其对CDAD的具体药理作用，以及药效物质基础和治疗机制仍不清楚，限制了临床应用。因此本研究复制了艰难梭菌相关性腹泻模型，从药效学、肠道微生物水平、代谢组学、质谱成像等方面探究生姜泻心汤治疗艰难梭菌相关性腹泻的机制和药效物质基础。<br>　　目的：本研究结合药效学、肠道菌群分析、代谢组学、质谱成像等技术，系统分析生姜泻心汤治疗CDAD 小鼠的药理作用和潜在药效物质成分，为生姜泻心汤的质量控制及临床应用提供科学证据。<br>　　方法：<br>　　1) 通过建立CDAD小鼠模型，从体重、毒素、病理、免疫等方面观察SJT对CDAD的药理作用。<br>　　2) 通过16S rDNA高通量测序技术分析SJT治疗后CDAD小鼠肠道菌群的变化。<br>　　3) 应用非靶向血清代谢组学和血清药理化学方法探讨SJT治疗CDAD的代谢机制和活性物质成分。<br>　　4) 通过气流辅助解吸电喷雾电离质谱成像(air- flow-assisted desorptionelectrospray ionization mass spectrom-etry imaging :AFADESI-MSI)技术得到SJT治疗CDAD小鼠时其药物成分在组织中的分布情况，并筛选出重要的组织原型成分。<br>　　5) 最后，基于Spearman相关分析构建了一个多尺度、多因素的网络进行综合可视化和分析。<br>　　结果：<br>　　1) 给予SJT治疗后，CDAD小鼠的体重明显上升，且显著降低了CDAD小鼠的粪便毒素水平。HE染色的结果显示SJT显著减轻了CDAD小鼠的结肠损伤。流式细胞分析显示SJT治疗后CD25占比增加（P＜0.05），LY6G、CD11B占比降低（P＜0.05）。炎症因子分析显示，SJT组的CXCL、IL1-β、TNF-α表达降低（P＜0.001），IL-22表达升高（P＜0.001）。<br>　　2) 与CDAD模型组相比，SJT组恢复了艰难梭菌诱导的肠道菌群紊乱，在丰富度和多样性上有显著回调，部分恢复了肠道菌群组成，在厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes） 3个门水平菌群和Muribaculaceae、Blautia、萨特氏菌属(Parasutterella)、乳梭菌属(Lachnoclostridium)、阿克曼氏菌(Akkermansia)、厌氧杆菌属(Anaerotruncus) 6个属水平菌群丰度上有显著性差异。<br>　　3) 非靶向血清代谢组学研究表明，SJT能够改善CDAD小鼠的代谢轮廓，显著回调了24个差异代谢物，共涉及8条代谢通路，包括牛磺酸和次牛磺酸代谢，而且还调节了代谢能量和氨基酸途径，例如抗坏血酸和醛酸代谢、甘油脂代谢、戊糖和葡萄糖醛酸互转。通过血清药物化学策略，筛选出17个SJT的入血成分。将差异代谢物与入血成分进行相关，筛选出山柰酚-3-阿拉伯呋喃糖苷（Kaempferol-3-arabofuranoside）、Suffruticoside A、甲基芦丁(methoxylutcolin)、6-姜烯酚（6-Shogaol）、6-姜辣素(6-gingerol)、阿魏酰酪胺（Feruloyltyramine）、3-羟基光甘草酚(Ⅱ)（3-Hydroxyglabrol (Ⅱ)）、汉黄芩素（wogonin）、小檗红碱（berberrubine）9种极度相关成分可能是SJT治疗CDAD的潜在有效物质。<br>　　4) 基于AFADESI-MSI技术对比SJT和MOD的质谱成像图，筛选出汉黄芩素（ wogonin ）、(E)-8 β ,17-EPoxylabd-12-ene-15,16-dial、姜 烯 酚（ (e)-[4]-shogaol ）、甘 草酸（ Glycyrrhizic acid ）、阿 魏酰 酪胺（N-trans-Feruloyltyramine）等16种SJT治疗CDAD的组织原型成分。<br>　　5) “药效指标-肠道菌群-入血成分-组织成分”的综合关联网络分析结果显示， SJT 治疗 CDAD 过程中，与不同维度相关数量最多的成分和指标有：汉黄芩素、人参皂苷Rf、人参二醇、汉黄芩素、石梓呋喃、hormothamnione、甘草酸、CD11b、LY6g。<br>　　结论：<br>　　本研究采用多种手段来深入探究SJT对CDAD小鼠的治疗作用和潜在活性物质成分。我们的研究发现，SJT组方治疗CDAD小鼠有显著效果。通过对药效指标、肠道菌群、血清代谢组学、质谱成像以及相关网络综合分析，我们成功地鉴定出组方中药味所含的潜在药效物质基础，包括汉黄芩素（wogonin）、hormothamnione、姜 烯 酚 （ Shogaol ） 、 姜 辣 素 （ gingerol ） 、 sodium sodium,(e)-7-hydroxy-1,7-bis(4-hydroxyPhenyl)hePt-5-ene-3s-sulfonate 、阿魏酰酪胺（Feruloyltyramine）、甘草酸（Glycyrrhizic acid）、石梓呋喃（Gmelofuran）、人参皂苷Rf（Ginsenoside-Rf），这些成分归属于生姜、干姜、甘草、大枣、人参、黄芩，说明SJT 治疗CDAD 时这些成分发挥了重要的作用，可能是 SJT 的药效物质基础。这些发现不仅为SJT 质量控制研究提供了参考依据，也为临床应用SJT 提供了科学证据。