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摘要背景及目的：舌鳞癌（tonguesquamouscellcarcinoma，TSCC）是口腔颌面部常见的一种恶性肿瘤，发病率约占40%。由于舌体特殊的解剖结构及生理特点，TSCC极易发生淋巴结及远处转移，并且局部复发率高、预后差。因此，探究影响TSCC增殖、侵袭和迁移等生物学行为的相关潜在机制，寻找可能存在的分子靶点，对TSCC的诊断、治疗及预后具有重要意义。<br>　　细胞分裂周期蛋白42（celldivisioncycle42，Cdc42）是小G蛋白Rho亚家族中的核心成员之一。Cdc42作为一种细胞信号转换的开关分子，参与细胞侵袭、迁移、增殖、凋亡等众多细胞生理过程的控制，在肿瘤的发生发展中发挥着至关重要的作用。本研究拟通过体外实验探讨Cdc42对人舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞迁移、侵袭、增殖凋亡等生物学行为的作用，为舌癌针对Cdc42的基因靶向治疗提供实验依据与理论基础。<br>　　研究方法：1.将人舌鳞状细胞癌CAL-27和SCC-4细胞随机分为3组，分别为Cdc42-siRNA组、阴性对照组和空白对照组。设计并构建针对人Cdc42基因序列的3条小干扰RNA（siRNA），分别为Cdc42-siRNA-1、Cdc42-siRNA-2及Cdc42-siRNA-3。通过脂质体瞬时转染技术在Cdc42-siRNA组和阴性对照组中分别转染Cdc42-siRNA和NC-siRNA，在空白对照组中仅加入相同剂量的转染试剂。应用qRT-PCR和Westernblot分别对Cdc42-siRNA组及两个对照组中Cdc42mRNA及蛋白的表达进行检测，在Cdc42-siRNA转染组中选择出敲低效果最明显的一组进行后续实验。<br>　　2.应用Westernblot检测各组舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞中Cdc42、上皮-间质转化相关蛋白中的波形蛋白（Vimentin）、间叶标记物N-钙粘附蛋白（N-cadherin）、上皮标记物E-钙粘附蛋白（E-cadherin）、金属基质蛋白酶（MMP-9）、MAPKJNK/p38通路相关蛋白p38-MAPK、JNK、p-p38-MAPK、p-JNK、细胞周期相关G1/S-特异性周期蛋白-D1（CyclinD1）、p21的表达。<br>　　3.采用Transwell侵袭实验及细胞划痕实验通过比较穿膜细胞数量及划痕愈合面积评估细胞的侵袭及迁移能力；采用CCK8实验通过检测OD值分析细胞的增殖能力；采用流式细胞术实验对细胞凋亡能力以及细胞周期的变化进行检测。<br>　　结果：1.qRT-PCR和Westernblot实验数据显示，沉默Cdc42后，Cdc42-siRNA-1、Cdc42-siRNA-2及Cdc42-siRNA-3组中Cdc42的mRNA及蛋白表达与两个对照组相比均显著降低（P＜0.05）。其中以Cdc42-siRNA-2组的沉默效率为最高，故在后续实验中应用Cdc42-siRNA-2组作为实验组。<br>　　2.细胞划痕实验结果发现，沉默Cdc42后，Cdc42-siRNA-2组中细胞的划痕相对愈合面积与两个对照组相比显著降低（P＜0.05），在Transwell实验中同样发现细胞的穿膜数量显著减少（P＜0.05），表明细胞的迁移及侵袭能力降低。<br>　　3.CCK8实验数据表明，沉默Cdc42后，Cdc42-siRNA-2组细胞的增殖能力与两个对照组相比显著降低（P＜0.05）；流式细胞术实验结果表明，与两个对照组相比，Cdc42-siRNA-2组细胞的凋亡能力增加（P＜0.05）、细胞周期阻滞在G1/S期（P＜0.05）。<br>　　4.Westernblot实验数据表明，沉默Cdc42后，Cdc42-siRNA-2组细胞中EMT相关蛋白E-cadherin的表达与两个对照组相比显著增加（P＜0.05），而N-cadherin、Vimentin的表达降低（P＜0.05），同时细胞侵袭相关蛋白MMP-9的表达降低（P＜0.05）；JNK、p38-MAPK蛋白表达无明显变化（P＞0.05），然而p-JNK、p-p38-MAPK蛋白表达明显降低（P＜0.05）；CyclinD1蛋白表达显著降低，而p21蛋白表达显著升高（P＜0.05）。<br>　　结论：沉默Cdc42可有效降低CAL-27和SCC-4细胞中Cdc42的表达，负向调节CAL-27和SCC-4细胞的侵袭、迁移以及增殖能力，同时能够对细胞周期进行调节，并促进细胞凋亡。其机制可能与阻断MAPKJNK/p38通路、抑制上皮细胞向间质细胞转变（EMT）和抑制TSCC的侵袭过程有关；同时可能通过调控CyclinD1及p21的表达，使细胞周期在G1/S期受阻，负向调控TSCC细胞增殖能力。