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摘要目的<br>　　1.评估鞘氨醇激酶1（SphingosineKinase1,Sphk1）表达水平在自发性脑出血（SpontaneousIntracerebralHemorrhage,SICH）中的诊断价值；<br>　　2.研究SICH患者血清中Sphk1表达水平与炎症因子、患者病情严重程度以及预后之间的关联；<br>　　3.分析Sphk1通过调控细胞凋亡相关因子对SICH的影响。<br>　　方法<br>　　本研究共分为三个部分。<br>　　一、基因筛选：在基因表达综合数据库（GEO）中通过对SICH患者（4名男性及7名女性）脑血肿周围组织和相应的对侧白质和灰质脑组织的基因芯片序列（GSE24265芯片）分析，以及阅读相关文献报道，本课题选择Sphk1作为研究对象。<br>　　二、临床研究：1.采用病例对照研究，选择2021年10月至2022年3月于泰州市人民医院就诊的90名SICH患者作为病例组，同期40名健康体检患者作为对照组。分别统计病例组与对照组患者的一般临床资料包括年龄、性别、吸烟史、高血压病史、糖尿病病史以及冠心病病史。2.记录SICH患者入院时格拉斯哥昏迷评分（GlasgowComaScale,GCS评分）和患病90天后格拉斯哥结局量表（GlasgowOutcomeScale,GOS评分）。3.采用实时荧光定量PCR（RealTimeQuantitative,RT-qPCR）法分别检测病例组与对照组患者血清Sphk1表达水平，同时绘制ROC（ReceiveROpeRatingChaRacteRisticCurve）曲线，评估Sphk1对SICH的诊断价值。4.酶联免疫吸附法（EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay,ELISA）分别检测病例组与对照组患者血清中肿瘤坏死因子α（Tumornecrosisfactor,TNF-α）、C反应蛋白（C-ReactiveProtein,CRP）、抑癌基因p53表达水平，采用Pearson相关性分析SICH患者血清Sphk1表达水平与CRP、p53、TNF-α、GCS评分以及GOS评分的关系。<br>　　三、细胞实验：1.体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）进行转染分组，分为Sphk1-siRNA转染组、转染物阴性对照组（NC组）和空白对照组（Control组），同时测定各组Sphk1表达水平。通过流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。2.通过RT-qPCR和蛋白印迹法（WesteRnBlot,WB）分别检测上述各组中凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（CysteinylAspatateSpeciificProteinase-3,Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（B-CellLymphoma-2,Bcl-2）以及p53的表达水平。<br>　　结果<br>　　1.临床研究结果：1）病例组患者血清Sphk1表达水平较对照组患者血清Sphk1表达水平明显上调（1.964±0.762VS1.051±0.823，P＜0.05）。ROC曲线结果分析显示：Sphk1曲线下面积为0.806，95%置信区间0.721-0.890，敏感度为0.644，特异度为0.875，最佳截断值为0.519，P＜0.05，差异有统计学意义。2）SICH患者血清中p53表达水平明显高于对照组（0.826±0.049VS0.799±0.047，P＜0.05），CRP及TNF-α在病例组与对照组患者血清中未见明显差异，P＞0.05；病例组患者血清中Sphk1表达水平与p53呈正相关性（r=0.649，P＜0.001）；与CRP无明显相关性（r=-0.016，P＞0.05）；与TNF-α无明显相关性（r=0.020，P＞0.05）；3）SICH患者血清中Sphk1表达水平与GCS评分呈负相关性（r=-0.524，P＜0.001）；与GOS评分呈负相关性（r=-0.676，P＜0.001）。<br>　　2.细胞实验结果：1）Sphk1在Sphk1-siRNA转染组中的表达水平较NC组与Control组相比明显下调（0.344±0.085VS1.002±0.108VS0.987±0.103，P＜0.05）。2）流式细胞仪分析显示：Sphk1-siRNA转染组中的细胞凋亡率较NC组与Control组相比明显下降（5.034%VS12.563%VS10.132%，P＜0.05）。3）细胞凋亡因子在mRNA的表达水平：抗凋亡因子Bcl-2在Sphk1-siRNA转染组中表达水平较NC组与Control组相比显著上调（2.039±0.142VS0.948±0.125VS0.996±0.101，P＜0.05）；促凋亡因子p53在Sphk1-siRNA转染组的表达水平较NC组与Control组相比明显下调（0.559±0.889VS1.040±0.113VS0.991±0.091，P＜0.05）；促凋亡因子Caspase-3在Sphk1-siRNA转染组的表达水平较NC组与Control组相比明显下调（0.599±0.031VS0.992±0.111VS0.978±0.120，P＜0.05）。4）细胞凋亡因子在蛋白水平的表达：抗凋亡因子Bcl-2在Sphk1-siRNA转染组中表达水平较NC组与Control组相比显著上调（1.919±0.146VS0.982±0.158VS0.881±0.200，P＜0.05）；促凋亡因子p53在Sphk1-siRNA转染组的表达水平较NC组与Control组相比明显下调（0.454±0.085VS1.071±0.109VS1.013±0.123，P＜0.05）；促凋亡因子Caspase-3在Sphk1-siRNA转染组的表达水平较NC组与Control组相比明显下调（0.445±0.081VS0.994±0.101VS0.956±0.115，P＜0.05）。<br>　　结论<br>　　1、Sphk1在SICH患者血清中表达水平较对照组相比明显升高，提示Sphk1可作为SICH的辅助诊断标志物；<br>　　2、p53在SICH患者血清中高表达，同时SICH患者血清中Sphk1表达水平与p53表达呈正相关性；<br>　　3、Sphk1表达水平与SICH患者疾病严重程度及预后相关；<br>　　4、Sphk1在SICH病理生理过程中的作用可能与其调控细胞凋亡有关，这可以帮助我们进一步了解SICH的作用机制。