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摘要目的骨髓间充质干细胞（Bonemarrow-derivedmesenchymalstemcells,BMSCs）的成骨和成脂分化之间的不平衡不仅是激素性股骨头坏死（Steroid-inducedosteonecrosisofthefemoralhead,SONFH）的重要病理特征，也是其主要发病机制。细胞衰老是BMSCs分化不平衡的主要原因之一。然而，细胞衰老是否可以通过调节BMSCs分化参与到SONFH的发生发展目前仍未得到确定。因此，本课题拟研究BMSCs衰老是否参与了SONFH的疾病进展，并阐明BMSCs衰老调控SONFH进展的作用机制。此外，探索抗衰老治疗对SONFH的影响，以为SONFH的防治提供新思路。<br>　　方法通过LPS和MPS联合注射构建SONFH大鼠模型，micro-CT和Hamp;E染色验证模型是否构建成功。提取大鼠BMSCs，通过SA-β-gal染色、qRT-PCR和WesternBlot实验分别检测衰老细胞量和p16、p21、p53、SIRT1的mRNA及蛋白表达量。体外实验通过地塞米松处理人BMSCs，运用SA-β-gal染色、qRT-PCR和WesternBlot分别检测衰老细胞量和p16、p21、p53、SIRT1的mRNA及蛋白表达量。运用H2O2处理人BMSCs以构建衰老细胞模型，SA-β-gal染色和qRT-PCR验证模型是否构建成功。通过qRT-PCR和WesternBlot实验检测细胞衰老对BMSCs的成骨和成脂分化的影响。<br>　　使用Targetscan、MirDIP、MiRDB三个数据库预测得到SIRT1的上游miRNAs。通过qRT-PCR检测上述miRNAs在地塞米松处理的人BMSCs和SONFH患者股骨头骨组织中的表达。运用脂质体转染miR-601mimics和inhibitors，分别过表达和敲低miR-601，通过qRT-PCR、WesternBlot实验、ARS染色和ORO染色检测miR-601对BMSCs的成骨和成脂分化的影响。通过qRT-PCR、WesternBlot实验、荧光素酶报告基因实验验证miR-601与SIRT1的靶向关系。<br>　　体内实验通过在SONFH大鼠股骨骨髓腔注射miR-601antagomir，过表达股骨骨髓腔内BMSCs中miR-601，运用micro-CT、Hamp;E染色和IHC评价过表达miR-601对SONFH的治疗作用。此外，通过向SONFH大鼠口服给药二甲双胍，研究抗衰老治疗对SONFH发生发展的作用。<br>　　结果<br>　　1、成功构建了SONFH大鼠模型，并提取了大鼠BMSCs，验证了SONFH大鼠的BMSCs中衰老细胞量及衰老表型增加。此外，证实了SONFH大鼠的BMSCs中SIRT1蛋白表达量明显降低。<br>　　2、与未经处理的人BMSCs相比，地塞米松处理可以使人BMSCs中衰老细胞量及衰老表型增加，而SIRT1蛋白表达量降低。<br>　　3、成功构建了建衰老人BMSCs模型，并验证了细胞衰老使人BMSCs的成骨分化减弱而成脂分化增强。<br>　　4、在SONFH患者股骨头骨组织及地塞米松处理的人BMSCs中miR-601表达量明显升高。过表达miR-601使人BMSCs的成骨分化减弱而成脂分化增强，而敲低miR-601显示出相反的效应。<br>　　5、SIRT1是miR-601的潜在靶基因，过表达miR-601显著降低了SIRT1的mRNA和蛋白水平；相反，敲低miR-601显著提高了SIRT1的mRNA和蛋白水平。<br>　　6、在SONFH大鼠模型中敲低miR-601及口服抗衰老药物二甲双胍可以缓解激素引起的大鼠股骨头坏死的严重程度。<br>　　7、miR-601通过靶向SIRT1加速BMSCs衰老从而促进其成脂分化抑制其成骨分化。<br>　　结论miR-601在SONFH组织和细胞中高表达。高表达的miR-601通过靶向SIRT1加速BMSCs衰老从而促进其成脂分化抑制其成骨分化，参与介导了SONFH的疾病进展。此外，初步证实二甲双胍通过抑制BMSCs衰老来阻碍SONFH的进展。因此，抗BMSCs衰老有望成为SONFH的新治疗靶点。