摘要目的:<br> 卵巢癌是目前为止较难早发现且 5 年生存率很低的妇科恶性肿瘤。由于早期缺乏有效的筛查手段,上皮性卵巢癌患者的 5 年生存率大约在 47%,主要由于初次手术不彻底和后期含铂化疗的耐药。ARHGAP30属于RhoGTP酶活化蛋白家族成员,控制许多信号转导通路真核细胞中的开关,产生多种生物学效应。研究发现 Rho GTP 酶中的 Rho A 与 PI3K 共同参与了内皮细胞血管增生反应,并形成病理血管重塑形,近期研究表明 ARHGAP30 参与肿瘤的进展。已知约 70%的 EOC 中,PI3K/AKT/mTOR 通路被上调,导致与血管生成、细胞存活和代谢相关的信号通路被过度激活。GEPIA(Gene Expression Profiling In-teractive Analysis)生信数据提示 ARHGAP30 在卵巢癌中异常表达,且在卵巢癌中高表达。然而,在EOC中ARHGAP30的表达是否存在差异,ARHGAP30的表达与 EOC,EOC 与 PI3K/AKT/mTOR 通路,以及 ARHGAP30、EOC、PI3K/AKT/mTOR 通路之间是否有着密切联系?这些是否影响肿瘤的侵袭增殖和浸润尚不清楚,需要进一步研究。<br> 本实验旨在研究 ARHGAP30 对人上皮性卵巢癌的影响机制,探讨ARHGAP30 调控 PI3K/AKT/mTOR 信号通路的具体机制,阐明 ARHGAP30 与PI3K/AKT/mTOR 信号通路在 EOC 中相互调控的作用,对 EOC 治疗提供新的治疗思路和方向。<br> 方法:<br> 1、qRT-PCR、免疫组化法检测 81 例 EOC 组织及其正常卵巢组织中ARHGAP30的mRNA和蛋白表达水平;<br> 2、qRT-PCR 法检测正常卵巢细胞( IOSE80 )和上皮性卵巢癌细胞(SKOV3、OVCAR3 和 A2780)中 ARHGAP30 的 mRNA 的表达情况;设计ARHGAP30 特异性 siRNA,分 NC 组,转染 SKOV3、OVCAR3 细胞组,RT-PCR检测其转染效率;<br> 3、在 SKOV3、OVCAR3 细胞中敲减 ARHGAP30 后, EdU 法检测siARHGAP30 细胞增殖能力;流式细胞仪检 siARHGAP30 细胞凋亡变化;Transwell观察siARHGAP30细胞侵袭迁移能力;<br> 4、采用 Western blot 检测在 SKOV3、OVCAR3 细胞中敲减 ARHGAP30 的表达后,以及通路抑制剂 Buparlisib 处理 SKOV3 和 OVCAR3 细胞后, PI3K/AKT/mTOR 信号通路关键蛋白(p-PI3K、p-AKT、p-mTOR)的表达水平变化;<br> 5、采用 Western blot 检测敲减 ARHGAP30 及通路抑制剂 Buparlisib 处理SKOV3和OVCAR3细胞后,细胞转移、增殖和凋亡标志物的表达情况;<br> 6、体内验证(动物实验)通过敲减 EOC 细胞(SKOV3 和 OVCAR3)中ARHGAP30的表达后,裸鼠瘤体外观、肿瘤体积、肿瘤重量表达情况。<br> 结果:<br> 1、EOC 组织中 ARHGAP30 的 mRNA 和蛋白丰度显著高于正常卵巢组织(P <0.01);<br> 2、EOC 细胞(SKOV3、OVCAR3、A2780)中 ARHGAP30 的 mRNA 水平显著高于人正常卵巢上皮细胞(IOSE80);SKOV3 和 OVCAR3 细胞转染siARHGAP30 干扰 ARHGAP30 的蛋白表达后,ARHGAP30 mRNA 水平均明显敲减;<br> 3、敲减ARHGAP30的表达后,SKOV3和OVCAR3细胞中,细胞侵袭、增殖、迁移能力明显下降,细胞凋亡显著增加;<br> 4、敲减 ARHGAP30 的表达及通路抑制剂 Buparlisib 处理 SKOV3 和OVCAR3 细胞后,可降低 PI3K/AKT/mTOR 信号通路关键蛋白的表达, Buparlisib 显示出与 ARHGAP30 敲低相同的效果;<br> 5、敲减 ARHGAP30 的表达及通路抑制剂 Buparlisib 处理 SKOV3 和OVCAR3细胞后,可降低细胞增殖(ki67)、转移(MMP9)和凋亡(Bax)标志物的表达,Buparlisib 显示出与 ARHGAP30 敲低相同的效果;<br> 6、体内验证通过敲减上皮性卵巢癌细胞( SKOV3 和 OVCAR3 )中ARHGAP30的表达后,瘤体外观、肿瘤体积、肿瘤重量表达明显下降。<br> 结论:<br> 1、ARHGAP30在EOC组织和细胞中表达均明显升高;<br> 2、敲减ARHGAP30后,SKOV3和OVCAR3细胞中,细胞侵袭、迁移、增殖、能力明显下降,细胞凋亡显著增加;并通过裸鼠动物实验(体内)得到进一步证实;<br> 3、在 EOC 细胞中敲减 ARHGAP30 的表达后,可通过调控PI3K/AKT/mTOR 信号通路显著抑制细胞侵袭迁移和增殖能力并诱导细胞凋亡。该结果为研究 EOC 中的增殖、侵袭和潜在恶性潜能机制提供了新的思路,为治疗EOC提供了新的思路和方向。
更多相关知识
- 浏览5
- 被引0
- 下载3
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文