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摘要目的：<br>　　探究血红素加氧酶-1（HO-1）修饰的骨髓间充质干细胞（BMMSCs）联合常温机械灌注（NMP）保存的循环死亡捐献（DCD）供肝改善受体预后及其分子机制。<br>　　方法：<br>　　1.使用全骨髓贴壁筛选法从大鼠股骨和胫骨中提取BMMSCs，并通过细胞形态、多系分化潜能、细胞表面特异性标记对BMMSCs进行鉴定；2.使用腺病毒转染法制备HO-1/BMMSCs，并对其过表达HO-1基因情况进行验证；3.建立大鼠DCD模型，获取DCD供肝，并建立稳定运转的大鼠用NMP系统，可在体外稳定灌注保存DCD供肝；4.利用NMP系统向DCD肝脏灌注HO-1/BMMSCs，并完成大鼠原位肝移植手术；5.对于肝脏缺血再灌注损伤（IRI）的研究采用同品系的大鼠进行同源耐受的大鼠肝移植手术，根据对肝脏的处理方式不同将实验分为5组：假手术（Sham）组、静态冷保存（SCS）组、NMP组、BMMSCs联合NMP（BMP）组、HO-1/BMMSCs联合NMP（BMP）组，术后即刻、1d、7d和14d处死大鼠，留取血液和肝组织标本，分别采用ELISA、流式细胞技术、组化学、qRT-PCR和Westernblot等技术检测肝功能、细胞因子、肝组织病理、单核细胞比例和移植肝Toll样受体4信号通路关键分子的表达情况；6.对于急性排斥反应的研究采用不同品系的大鼠完成肝移植的急性排斥反应模型，根据对肝脏的处理方式不同，将实验分为6组：Sham、SCS、NMP组、BMP组、BMP组和NMP组联合术后应用他克莫司（FK506）组，在肝移植后7d和14d留取肝脏、脾脏及血清标本。利用肝组织病理学损伤变化及肝功能变化水平评估急性排斥反应严重程度，利用基因芯片技术检测不同受体内肝脏差异基因表达，流式细胞技术分析受体内NKT细胞变化。<br>　　结果：<br>　　1.利用贴壁法获得了的BMMSCs，通过细胞形态、表面特征性的分子标记、成脂分化及成骨分化鉴定证实了我们制备的BMMSCs符合国际标准。在此基础上利用腺病毒转染成功制备了HO-1/BMMSCs；<br>　　2.NMP可以使BMMSCs在体外保存期间定植于供肝内，并且在移植术后HO-1/BMMSCs在移植肝内定植情况优于BMMSCs；<br>　　3.在同品系大鼠肝移植模型中对IRI的研究结果为：SCS组受体出现转氨酶、胆红素等明显升高，并且肝脏组织损伤严重、中位生存时间较短（2.5d）。HMP组受体显示肝功能及肝脏病理结果明显好转，中位生存时间延长（＞60d），血清及肝脏促炎细胞因子表达量减少（P＜0.05）。同时观察与NMP和SCS组受体比较，HMP组和BMP组外周血单核细胞及肝脏组织HMGB1表达量明显降低（P＜0.05），TLR4信号通路标志蛋白表达显著减少（P＜0.05），并且HMP组上述指标显著低于BMP组（P＜0.05）；<br>　　4.在急性排斥反应大鼠肝移植模型中的研究结果为：供肝内携带HO-1/BMMSCs的情况下，移植肝的急性排斥反应情况得到明显控制，生存时间明显优于应用BMMSCs及未使用BMMSCs的对照组。HO-1/BMMSCs的应用减低了移植术后肝脏内的NKT细胞数量，增加了NKT细胞表面抑制性受体BTLA及CD160的表达，并降低NKT细胞干扰素-γ（IFN-γ）的表达量，进而抑制NK细胞及CD8+T细胞活化，减轻肝移植排斥反应的发生。<br>　　结论：<br>　　1.NMP既可以成为修复DCD供肝的方法，也可以作为BMMSCs向供肝内输注的新方法；HO-1基因可以延长BMMSCs在靶器官内的存活时间和增强其修复作用。<br>　　2.HO-1/BMMSCs联合NMP可以减轻DCD肝移植的IRI，其保护机制与调节TLR4/NF-кb介导的炎症反应通路有关。<br>　　3.经NMP系统输注的HO-1/BMMSCs，减少了大鼠急性排斥反应模型移植肝内NKT细胞的数量，并上调NKT细胞共抑制受体的表达，降低了NKT细胞分泌IFN-γ的水平，进而抑制了急性排斥反应。