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摘要【目的】<br>　　少突胶质前体细胞（oligodendrocyteprogenitorcell，OPC）是中枢神经系统中关键的细胞组分，因其低还原性谷胱甘肽和高铁离子状态，少突胶质前体细胞在中枢神经系统中极易受到氧化刺激而发生死亡。近年来，新发现的铁死亡是一种铁依赖性氧化损伤引起的细胞程序性死亡，少突胶质前体细胞的死亡方式可能与铁死亡相关。本研究旨在体外构建少突胶质前体细胞铁死亡模型，筛选出抑制少突胶质前体细胞铁死亡的有效药物，并明确其抑制少突胶质前体细胞铁死亡的作用机制，为涉及少突胶质谱系细胞死亡的相关疾病的机制研究奠定基础，并为相关疾病的治疗提供新的作用靶点及修复策略。<br>　　【方法】<br>　　1.制备、鉴定少突胶质前体细胞：体外培养OLN-93少突胶质前体细胞，并用olig2进行少突胶质前体细胞的鉴定，并通过谷胱甘肽过氧化物酶4（GlutathionePeroxidase4，GPX4）免疫荧光染色明确其在OLN-93少突胶质前体细胞中表达情况。<br>　　2.构建少突胶质前体细胞铁死亡模型：应用GPX4抑制剂RSL3构建少突胶质前体细胞铁死亡模型，通过MTT检测细胞活力；通过PI/Hoechst染色检测细胞的死亡情况；通过ROS染色检测活性氧的产生；通过WesternBlot检测铁死亡特异性标志物GPX4、胱氨酸/谷氨酸逆转运体轻链（SystemXc-，xCT）、长链脂酰辅酶A合成酶4（Acyl-CoAsynthetaselongchainfamilymember4，ACSL4）的蛋白水平。<br>　　3.筛选抑制少突胶质前体细胞铁死亡的抑制剂：通过MTT检测细胞活力比较铁螯合剂去铁胺、自由基清除剂依达拉奉和脂质过氧化阻断剂liproxstatin-1三种药物对OLN-93少突胶质前体细胞铁死亡的抑制效果，筛选出有效的铁死亡抑制剂。<br>　　4.探究liproxstatin-1抑制少突胶质前体细胞铁死亡的机制：通过PI/Hoechst染色确定OLN-93少突胶质前体细胞的死亡情况；检测OLN-93少突胶质前体细胞丙二醛（Malondialdehyde，MDA）和谷胱甘肽（Glutathione，GSH）的表达水平；通过WesternBlot检测铁死亡关键蛋白GPX4的表达；通过MitoPeDPP染色检测OLN-93少突胶质前体细胞中脂质过氧化物的产生情况；通过免疫荧光染色检测铁死亡抑制蛋白1（FerroptosisSuppressorProtein1，FSP1）的表达水平，以此来阐明铁死亡抑制剂liproxstatin-1抑制OLN-93少突胶质前体细胞铁死亡的具体机制。<br>　　【结果】<br>　　1.OLN-93少突胶质前体细胞鉴定，OLN-93少突胶质前体细胞表达GPX4通过细胞免疫荧光染色进行细胞鉴定，olig2和DAPI高度共定位，此OLN-93少突胶质前体细胞适用于后续的实验研究。OLN-93少突胶质前体细胞表达GPX4，且GPX4和细胞核出现共定位，即GPX4表达于OLN-93少突胶质前体细胞的细胞核中。<br>　　2.抑制GPX4导致OLN-93少突胶质前体细胞铁死亡在GPX4抑制剂RSL3的诱导下，OLN-93少突胶质前体细胞活性明显降低，产生的活性氧明显增多；WesternBlot检测表明，铁死亡相关特异性蛋白GPX4、xCT、ACSL4的表达量下降，有统计学意义。<br>　　3.Liproxstatin-1是一种有效的铁死亡抑制剂通过半数最大效应浓度EC50检测显示，liproxstatin-1比铁螯合剂去铁胺、自由基清除剂依达拉奉具有更小的EC50，其具有更强的铁死亡抑制作用，是一种有效的铁死亡抑制剂。<br>　　4.Liproxstatin-1抑制OLN-93少突胶质前体细胞铁死亡RSL3诱导OLN-93少突胶质前体细胞发生铁死亡以后，细胞存活明显降低，MDA表达量增加，脂质过氧化过程增强，铁死亡保护性蛋白GPX4、GSH、FSP1的表达量降低，而在liproxstatin-1处理后，细胞活力增加，MDA表达量降低，脂质过氧化减弱，GPX4、GSH、FSP1的表达量明显增加，有统计学意义。<br>　　【结论】<br>　　1.GPX4的靶向抑制剂RSL3可诱导OLN-93少突胶质前体细胞发生铁死亡。本研究系国际上首次建立少突胶质谱系细胞铁死亡模型，通过应用GPX4的靶向抑制剂RSL3成功诱导OLN-93少突胶质前体细胞铁死亡，并证明该模型具有可行性、特异性、科学性和可靠性。<br>　　2.Liproxstatin-1是一种有效的铁死亡抑制剂。脂质过氧化阻断剂liproxstatin-1比铁螯合剂去铁胺和自由基清除剂依达拉奉具有更强的保护OLN-93少突胶质前体细胞免受铁死亡的潜力。<br>　　3.Liproxstatin-1抑制RSL3诱导的OLN-93少突胶质前体细胞铁死亡的机制。Liproxstatin-1通过抑制脂质过氧化过程，抑制OLN-93少突胶质前体细胞铁死亡引起的GSH/GPX4轴失活，同时增强铁死亡抑制蛋白1的表达，从而抑制RSL3诱导的OLN-93少突胶质细胞系的铁死亡，对其产生保护作用，此研究为涉及少突胶质谱系细胞死亡及铁死亡相关中枢系统疾病的治疗奠定理论基础，并为脊髓损伤、神经退行性疾病等相关疾病提供新的治疗靶点和修复策略。