检索历史 清除

摘要目的：鼠伤寒沙门菌（Salmonella typhimurium）是肠杆菌科中最重要的导致食源性疾病的病原菌属，可导致严重的胃肠炎和腹泻；也是导致动物源性食品污染及食源性疾病爆发的主要病原菌之一，对人类和畜禽公共卫生安全具有重要研究意义。目前沙门菌的耐药性和持留菌问题非常严重，迫切需要开发新型杀菌剂。麝香草酚是从天然草本植物中提取出的一种低毒、副作用小的具有广谱抑菌作用的精油单体化合物。但麝香草酚抑杀鼠伤寒沙门菌的分子机制还不清楚。本研究旨在初步揭示麝香草酚对鼠伤寒沙门菌的抑杀机制，并探讨未表征蛋白YibT在鼠伤寒沙门菌中的生物学功能，以期为沙门菌污染的有效控制和新型杀菌剂的研发提供一定的理论依据。<br>　　方法：以鼠伤寒沙门菌为研究对象，使用荧光酶标仪测定了麝香草酚压力下鼠伤寒沙门菌的细菌生存活力，利用激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜，观察麝香草酚对沙门菌结构形态的影响，基于细胞渗透性分析，细菌生物膜形成测定实验，Hela细胞侵袭实验等研究方法初步探讨了麝香草酚对沙门菌生长过程的影响。采用qRT-PCR技术鉴定了与沙门菌外界应激相关的一种未知蛋白yibT的mRNA表达水平；利用λ-Red基因重组技术及表达质粒pET28a构建yibT缺失株、回补株和过表达株，基于stitch网络预测分析，并初步研究了yibT基因在鼠伤寒沙门菌中的生物学功能。<br>　　结果：药敏实验结果表明，麝香草酚对鼠伤寒沙门菌的亚致死浓度为75μg/mL。荧光显微镜观察发现，相较于阴性对照，处理组出现红色凋亡菌体，提示麝香草酚亚致死浓度压力下鼠伤寒沙门菌细胞膜发生破损。透射电子显微镜观察可得，经亚致死浓度处理过后的沙门菌其细胞膜发生褶皱，而DMSO处理过后的细菌菌体较WT无明显变化。细菌生存活力实验证明，经麝香草酚处理过的沙门菌生存活力显著（plt;0.05）小于其对照组。在麝香草酚作用下，鼠伤寒沙门菌生物膜形成能力减少约40%（plt;0.05），说明麝香草酚会影响细菌的生物膜形成。研究发现，鼠伤寒沙门细胞膜的通透性随着麝香草酚浓度的升高而增强；本研究利用λ-Red基因重组系统成功构建出沙门菌缺失株WTΔyibT ，利用表达质粒 pET28a构建了回补株WTΔyibT/pyibT以及过表达菌株WT/pyibT。研究初步表明，yibT基因参与调控了鼠伤寒沙门菌的生长速率、细胞外膜功能和生物膜形成等生物学过程；研究证实，yibT正调节鼠伤寒沙门菌生物膜形成的主要因子csgD的mRNA表达水平，yibT还参与调控ABC转运蛋白lptA-F和外膜脂多糖LPS的合成。<br>　　结论：本研究初步揭示了麝香草酚通过影响鼠伤寒沙门菌细胞膜的通透性、完整性、细菌的运动性以及生物膜的形成来发挥其抑杀作用。并初步证实了一种影响菌体DNA复制，参与鼠伤寒沙门菌生物膜形成及调控细胞外膜功能的未表征蛋白YibT的生物学作用，其极有可能是一种全局转录调控因子或DNA聚合酶，其参与沙门菌生长过程的生物学分子调控机制还需进行进一步研究。