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摘要目的：在既往的研究基础上进一步探讨长链非编码RNAHCP5诱导肾细胞癌对索拉非尼耐药作用及机制分析。<br>　　方法：<br>　　（1）研究建立在已经构建好的索拉非尼耐药肾癌细胞，即稳定高表达HCP5的769-P和786-O肾透明细胞癌细胞系。使用荧光原位杂交技术检测HCP5在细胞中的定位；流式细胞术实验分析肾癌细胞早期凋亡比例及细胞周期差异；通过蛋白质印迹实验检测凋亡蛋白CleavedCaspase3及上皮间充质转化（Epithelial-mesenchymaltransition,EMT）过程相关蛋白的表达水平。<br>　　（2）前期我们发现HCP5与miR-106b-5p相互结合，并筛选出HCP5/miR-106b-5p下游可能的靶基因INHBA、FAM45A、NT5E、TMCC3、LDLR。在此基础上，我们使用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测这5个靶基因mRNA的表达量，使用siRNA进行细胞转染敲减TMCC3的表达量，再使用qRT-PCR检测转染效率；流式细胞术实验分析敲减TMCC3后肾癌细胞早期凋亡比例的变化；WesternBlotting检测靶基因TMCC3的表达水平，分析敲减靶基因TMCC3后对PTEN/AKT/mTOR通路蛋白、凋亡蛋白CleavedCaspase3及EMT过程相关蛋白的表达变化；CCK-8实验检测敲减TMCC3后肾癌细胞对索拉非尼耐药程度的变化。<br>　　（3）裸鼠皮下成瘤实验测量皮下瘤的体积和重量验证HCP5的成瘤性；qRT-PCR检测HCP5及TMCC3的表达量；WesternBlotting检测PTEN/AKT/mTOR通路蛋白的表达水平；免疫组织化学分析皮下瘤的增殖能力。<br>　　结果：<br>　　（1）通过荧光原位杂交实验，使用探针检测过表达HCP5后的769-P和786-O肾癌细胞，结果显示LncRNAHCP5主要定位在细胞质中，这表明HCP5主要在细胞质中发挥生物学功能。流式细胞术实验检测了上调HCP5的肾癌细胞早期凋亡比例低于对照组肾癌细胞，另外在WesternBlotting实验中结果显示实验组中凋亡蛋白CleavedCaspase3较对照组有显著降低，这两者表明过表达HCP5抑制肾癌细胞的凋亡。此外使用流式细胞术检测细胞周期的变化，结果显示了上调HCP5后使细胞停滞在G1期的比例下降，同时S期+G2期比例上升，促进了肾癌细胞的增殖。WesternBlotting结果表明实验组HCP5高表达的肾癌细胞较对照组细胞中上皮生物标志物E-cadherin蛋白的表达显著下降，同时间充质生物标志物N-cadherin及Vimentin蛋白表达量显著增加，表明可以促进EMT过程。<br>　　（2）为了验证HCP5/miR-106b-5p下游的靶基因，通过qRT-PCR检测5个前期已筛选出的mRNA（INHBA、FAM45A、NT5E、TMCC3、LDLR）在过表达HCP5的肾癌细胞中相对于对照组的表达量，结果显示TMCC3的表达量最高，并检测TMCC3蛋白的表达较对照组也有所上调，因此选择TMCC3为下游mRNA靶基因进行后续实验分析。接着使用3种siRNA敲减TMCC3的表达，qRT-PCR检测TMCC3表达量的下降。随后，使用siRNA下调TMCC3的表达来验证TMCC3对耐药性的影响。通过WesternBlotting实验表明了HCP5激活的PTEN/AKT/mTOR通路被siRNA-TMCC3有效抑制；通过流式细胞术实验发现敲低TMCC3后逆转了HCP5诱导的早期细胞凋亡减少，进而早期凋亡比例显著增加。WesternBlotting也显示了凋亡蛋白CleavedCaspase3表达量同样也有所增加；TMCC3下调后逆转了HCP5所致的上皮间充质相关蛋白的表达；CCK-8结果表明敲减TMCC3后肾癌细胞对索拉非尼的敏感性增加。因此，我们推测TMCC3作为靶基因可以逆转HCP5所致的肾癌细胞对索拉非尼耐药性。<br>　　（3）裸鼠皮下成瘤实验提示过表达HCP5后促进肿瘤的增长，qRT-PCR检测过表达HCP5瘤组织中的TMCC3表达显著增加，WesternBlotting结果显示在裸鼠体内实验中过表达HCP5可以激活PTEN/AKT/mTOR通路，免疫组化结果显示Ki-67表达增加，表明HCP5可以促进肿瘤的增殖。<br>　　结论：过表达HCP5后可以导致肾癌细胞对索拉非尼耐药；HCP5/miR-106b-5p轴下游靶基因系TMCC3，敲低TMCC3后可以逆转HCP5诱导的索拉非尼耐药，其机制是抑制了PTEN/AKT/mTOR信号通路。过表达HCP5促进了肾癌在裸鼠皮下成瘤的进展。