检索历史 清除

摘要目的：<br>　　胃癌（gastric cancer，GC）发病率在全球恶性肿瘤中排第6位，死亡率排第3位，是肿瘤患者死亡的主要原因之一。早期胃癌通常缺乏特定症状，现阶段中国80%的患者被发现时已是胃癌晚期。LncRNA是一种功能强大的非编码RNA，可以调控胃癌在内的多种肿瘤。最新研究显示LINC01342在卵巢癌中高表达并且和卵巢癌患者的预后相关。但LINC01342在胃癌中的表达情况及作用机制尚不明确。本课题旨在研究LINC01342在胃癌患者组织、血浆中的表达情况及其临床相关性；通过细胞实验探究LINC01342对胃癌细胞生物学行为的影响；通过后续实验探究LINC01342在胃癌发生过程中的潜在作用机制，以期对胃癌的临床诊疗及后续研究提供帮助。<br>　　方法：<br>　　1.通过生物信息学分析，筛选出LINC01342。<br>　　2.采用RT-qPCR检测LINC01342在70例胃癌组织、对应癌旁组织中的表达，结合临床数据分析LINC01342表达与临床数据的相关性；绘制生存曲线分析LINC01342的表达与患者总体生存情况的相关性；检测LINC01342在22例胃癌患者血浆及22例同期收集的健康者血浆中的表达，绘制ROC曲线评估LINC01342在胃癌中的诊断价值。<br>　　3.采用RNA干扰实验敲低LINC01342，检测敲低效率；研究敲低LINC01342对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等功能的影响。<br>　　4.采用RT-qPCR、Western blot等方法寻找并明确LINC01342的潜在下游作用机制。采用细胞形态学实验观察敲低LINC01342对胃癌细胞EMT表型的影响。采用RT-qPCR、Western blot验证临床胃癌样本中EMT基因、蛋白的表达及其与LINC01342的相关性。<br>　　结果：<br>　　1.RT-qPCR结果显示LINC01342在胃癌组织的表达水平较对应的癌旁组织显著升高， LINC01342的表达量与胃癌患者的TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化、邻近组织侵袭成正相关。生存曲线表明LINC01342高表达的患者总体生存较低表达患者更差；血浆LINC01342筛查胃癌的ROC曲线下面积为0.715 （ 95% CI ：0.559～0.87 ） ，提示LINC01342在临床胃癌的诊断方面具有潜在价值。<br>　　2. RNA干扰实验结果显示，所设计的LINC01342寡核苷酸敲低效率满意。敲低LINC01342显著抑制AGS、HGC-27的增殖、迁移及侵袭能力，同时增加其凋亡水平。<br>　　3. RT-qPCR结果显示， LINC01342敲低显著影响TWIST-调控的EMT通路，表现为TWIST、FN1、MMP9、N-cad的表达降低及E-cad的表达增高，而对SNAIL、SLUG等经典分子无明显影响。Western blot实验亦支持上述结果。<br>　　4.细胞形态学实验显示， LINC01342敲低导致AGS、HGC-27均由纺锤体样变为鹅卵石样，提示LINC01342敲低可减弱胃癌细胞的EMT形态。<br>　　5.胃癌组织的RT-qPCR、Western blot结果亦显示，高表达LINC01342组TWIST、FN1、MMP9、N-cad的表达水平增高，同时E-cad表达水平下降，提示LINC01342在胃癌中的表达与TWIST调控的EMT通路存在相关性。<br>　　结论：<br>　　LINC01342在胃癌组织、血浆中表达显著增高，且LINC01342的表达与胃癌患者的TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化、邻近组织侵袭及总体生存密切相关；LINC01342可能通过TWIST调控的EMT通路影响胃癌的多种恶性表型，最终促进胃癌的发生发展。