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温阳通脉补血法治疗特发性肺纤维化的临床观察及通过调控氧化应激和铁死亡改善肺纤维化的实验研究

摘要目的:观察温阳通脉补血法的代表方加味黄芪桂枝五物汤治疗特发性肺纤维化的临床疗效,并进行动物实验研究其作用机制,为今后研究和治疗肺纤维化提供更多思路。<br>  方法:第一部分:收集山东中医药大学附属医院呼吸与危重症医学科门诊从2021年10月至2022年10月收治的42例特发性肺纤维化患者,随机分为对照组和试验组,分别应用吡非尼酮和加味黄芪桂枝五物汤治疗,并分别于治疗前和治疗对患者进行六分钟步行试验(6MWT)、肺功能(FVC、DLco)及中医临床症状分级量化评分,最后归纳、总结、分析,以评价各治疗组治疗效果。第二部分:36只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、吡非尼酮组、中药低、中、高剂量组,每组6只。除空白组外,均使用博莱霉素气管滴入法构建肺纤维化大鼠模型,造模成功后各组给予相应药物灌胃28天后处死大鼠,称取大鼠肺湿重和体重计算肺系数;通过苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察各组大鼠肺组织病理学的改变;碱水解法检测大鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)的含量;Elisa法观察加味黄芪桂枝五物汤对肺纤维化大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量的影响;RT-PCR法测定肺组织Nrf2、GPX4、SLC7A11、COX2、FSP1的mRNA表达量;相应试剂盒检测大鼠肺组织GSH、SOD、MDA、铁离子含量,最后应用SPSS统计软件对结果进行分析,以探讨加味黄芪桂枝五物汤治疗特发性肺纤维化的作用机制。<br>  结果:第一部分:临床研究结果显示,加味黄芪桂枝五物汤组可延长IPF患者6MWT距离,治疗前后对比,差异具有统计学意义(P<0.05),吡非尼酮组治疗前后的6MWT结果呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后加味黄芪桂枝五物汤组患者6MWT结果优于吡非尼酮组;对于用力肺活量(FVC)和一氧化碳弥散量(DLco),两组患者治疗前后均没有明显差异,不具有统计学意义(P>0.05);加味黄芪桂枝五物汤组可降低中医临床症状积分总分,改善患者临床症状,治疗前后对比,差异具有明显统计学意义(P<0.01),对照组治疗前后中医临床症状总积分下降不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05),加味黄芪桂枝五物汤组优于吡非尼酮组;在不良反应发生率方面,吡非尼酮组共有4例患者组出现不良反应,加味黄芪桂枝五物汤组有1例患者出现不良反应,加味黄芪桂枝五物汤组不良反应发生率低于对照组。第二部分:动物实验研究结果显示,与空白组相比,其余各组HYP含量均有所升高、HE染色和Masson三色染色可见不同程度的炎性细胞浸润、肺纤维化改变和胶原沉积,证明造模成功。与模型组相比,吡非尼酮组及中药低、中、高剂量组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α含量均有所降低,差异具有明显统计学意义(P<0.01),与吡非尼酮组相比,中药高剂量组血清IL-1β的表达差异不明显,无统计学意义(P>0.05);加味黄芪桂枝五物汤可提高肺组织SOD、GSH表达水平,降低肺组织MDA表达水平,并呈剂量依赖性,与模型组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05);与模型组相比,加味黄芪桂枝五物汤可提高肺组织Nrf2、GPX4、SLC7A11mRNA表达水平,降低COX2、FSP1mRNA表达及Fe+含量,降低大鼠肺纤维化程度,差异具有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05)。<br>  结论:加味黄芪桂枝五物汤可以明显减轻特发性肺纤维化患者的中医临床症状,治疗后中医临床症状分级量化评分较前改善,延长六分钟步行试验距离,减缓肺功能指标的进展,其机制可能是通过抑制氧化应激和铁死亡减少纤维化肺组织中铁的沉积和脂质过氧化物的积累来实现的。由此,温阳通脉补血法的代表方加味黄芪桂枝五物汤对于治疗和研究IPF有较高应用价值。

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