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摘要肝细胞癌是全球癌症发病率和死亡率都是高居前位的恶性肿瘤之一，克服肝癌细胞的转移是解决其治疗瓶颈的关键。重要的是上皮细胞间质转化（EMT）促进肝癌细胞的发生、发展和转移。如此形态学转型是由关键基因表达系谱决定其细胞身份，其中MicroRNA是参与基因转录调控的重要角色，在EMT中发挥不可替代的作用。抗氧化转录因子Nrf2缺失导致MicroRNA表达异常，诱发心血管疾病、炎症和自身免疫疾病、癌症转移等众多疾病已被广泛报道。Nrf1和Nrf2作为生物体管控氧化还原稳态的关键转录因子，同属于CNC-bZIP家族成员，均与sMaf或其他bZIP家族蛋白形成异源二聚体，结合到目标启动子区抗氧化和/或亲电反应元件（AREs/EpREs）上激活下游基因表达。已有研究表明Nrf2可调控多个miRNAs而介导肝癌细胞 EMT 进程转归。而 Nrf1 则是一个必不可少的氧化还原稳态决定因子，管控着相关驱动基因表达，但对miRNA调控研究甚少。<br>　　本文探究MicroRNA介导Nrf1和Nrf2调控肝癌细胞EMT的进程中发挥的功能，实验得出的研究结果如下：<br>　　（1）HepG2细胞中敲除Nrf1和Nrf2之后，两种细胞产生了差异的EMT表型。其中，敲除Nrf1细胞的形态发生改变由圆形状变为梭形状，其细胞迁移能力和侵袭力均有加强。部分关联的转录因子（EMT-TFs）及其标志基因表达发生显著改变。上皮基因CDH1表达减少，而间质基因CDH2上升。而Nrf2敲除细胞形态则未见明显改变，其细胞迁移力和侵袭力相对减弱。<br>　　（2）小RNA测序发现Nrf1和Nrf2敲除均改变了细胞内大量miRNA的表达水平。其中，318个miRNA发生显著性改变。通过靶基因预测，靶基因关联，层次聚类分析，靶基因 GO富集和KEGG通路富集等生物信息学分析，结果筛选出16 个候选 miRNA。再综合靶点和文献分析及实际作用效应，进一步优选出关键miR-3187-3p和miR-1247-5p。<br>　　（3）miR-3187-3p靶向SNAI1及其下游EMT标志分子CDH1和CDH2, 从而调控肝癌细胞EMT进程。慢病毒包装miR-3187-3p稳定表达细胞系，即G2-miR-3187-3p，不仅影响肝癌细胞 EMT 进程，也可影响肝癌细胞凋亡、周期、增殖。miR-1247-5p 靶向MMP15、MMP17，调控肝癌细胞EMT进程，慢病毒包装miR-1247-5p稳定表达细胞系，即G2-miR-1247-5p，同样影响肝癌细胞的凋亡、周期、增殖。<br>　　（4）Nrf1通过结合miR-3187-3p启动子区域的ARE位点，激活miR-3187-3p的表达，后者靶向抑制SNAI1的表达，从而激活CDH1，抑制CDH2，最终阻止 EMT的进程。而Nrf2通过结合miR-1247-5p启动子区域的ARE位点，抑制miR-1247-5p的表达，解除了miR-1247-5p对MMP15、MMP17的抑制作用，促进EMT的发生。<br>　　综上研究结果，本文探究了肝癌细胞中Nrf1/2敲除后EMT表型及其关键蛋白分子的差异改变。通过小RNA测序，综合生物信息学分析筛选出了具有关键调控作用的miR-3187-3p和miR-1247-5p。系统探究了miR-3187-3p和miR-1247-5p在细胞迁移侵袭，周期，凋亡和增殖的相关生物学功能，揭示了miR-3187-3p和miR-1247-5p通过介导Nrf1/2差异调控肝癌细胞EMT的分子机制。