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基于生物传感技术的SARS-CoV-2抗原筛检新方法的研究

摘要新型冠状病毒感染作为典型的新发突发病毒性传染病对公共卫生安全带来前所未有的挑战,及早发现并隔离病毒感染者和追踪密切接触者是阻断病毒传播的重要措施,同时对其开展的防控研究可以为未来出现的新发突发病毒性传染病的防控提供借鉴和经验。目前,针对严重急性呼吸综合征冠状病毒 2(SARS-CoV-2)的检测主要分为核酸检测、抗体检测和抗原检测三类。SARS-CoV-2 核酸检测是确诊新型冠状病毒感染的金标准,但它的程序复杂,耗时较长并且需要昂贵的仪器和专业的人员。SARS-CoV-2 抗体检测成本低,检测快,但对SARS-CoV-2 感染的早期诊断不够敏感。基于 SARS-CoV-2 表面刺突(Spike, S)蛋白检测的抗原检测可作为SARS-CoV-2存在的直接证据且无需严格的实验室条件、昂贵的仪器和专业的操作,在新型冠状病毒感染的筛检中具有广阔的应用前景,但体液中病毒载量低是 SARS-CoV-2 S 蛋白检测面临的一个难题,亟待解决。因此,本研究将动态DNA 自组装技术与功能纳米复合材料相结合,构建了三种 SARS-CoV-2 S 蛋白检测新方法,为 SARS-CoV-2 抗原筛检提供了技术储备和方法依据,为新发突发病毒性传染病检测提供了重要经验和技术指导。<br>  1. 利用适体结合诱导的多重发夹组装策略构建电化学适体传感器用于 SARS-CoV-2 S蛋白的超灵敏检测。在 SARS-CoV-2存在的情况下,适体-蛋白相结合,拉近一对适体距离引发链置换反应,从而触发多个发夹组装,在电极表面产生长链 DNA 结构。由于发夹探针被生物素标记,大量链霉亲和素碱性磷酸酶可以通过生物素-链霉亲和素相互作用进一步引入电极界面,从而在含有 1-萘酚磷酸盐的电解质溶液中产生强电化学信号。由于非酶促多重发夹组装信号放大策略,该传感器检测SARS-CoV-2 S蛋白的线性范围从50 fg/mL到50 ng/mL,检测限为 9.79 fg/mL。该传感器为环境温度下新发突发病毒性传染病的即时检测提供了新的思路和技术手段。<br>  2. 通过在二维片层材料二硫化钨(WS2)与零维材料石墨烯量子点(GQDs)相结合形成的异质结构上原位还原 AuPtNPs 合成 WS2-GQDs@AuPt 纳米复合材料。利用 WS2-GQDs@AuPt纳米复合材料巨大的比表面积和优异的电化学性能构建阻抗型电化学免疫传感器用于SARS-CoV-2 S 蛋白的超灵敏检测。在 SARS-CoV-2 存在的情况下, WS2-GQDs@AuPt 纳米复合材料表面固定的 SARS-CoV-2 抗体可对其进行识别和捕获,导致电极界面阻抗发生变化,进而影响电化学信号。该传感器检测 SARS-CoV-2 S 蛋白的线性范围从 1 pg/mL 到 1μg/mL,检测限为 0.27 pg/mL。该传感器构造简单,具有良好的稳定性,在SARS-CoV-2抗原筛检中具有实际应用潜力。<br>  3. 通过在石墨相氮化碳(g-C3N4)表面原位生长碳点(CDs)合成了 CDs@g-C3N4纳米复合材料,实现了 CDs 在纳米载体 g-C3N4的高效固载,同时,纳米载体 g-C3N4能够显著增强 CDs 的电化学发光(ECL)效率。利用CDs@g-C3N4纳米复合材料高效的ECL性能构建夹心型 ECL 免疫传感器用于 SARS-CoV-2 S 蛋白的超灵敏检测。在SARS-CoV-2 存在的情况下,电极表面固定的 SARS-CoV-2 抗体 1 可对其进行识别和捕获,另外,CDs@g-C3N4作为信号标签,其上交联的抗体 2可同时对 SARS-CoV-2进行识别和捕获形成夹心结构。该传感器检测SARS-CoV-2 S蛋白的线性范围从1 fg/mL到1 ng/mL,检测限为 0.80 fg/mL。该传感器为 SARS-CoV-2 抗原筛检提供了一种高效、灵敏、经济的ECL检测方法。

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