摘要目的:制备一种羧甲基壳聚糖重组人源Ⅲ型胶原蛋白凝胶,并通过大鼠剖宫产模型研究该凝胶对子宫切口愈合的影响。<br> 研究方法:使用京尼平交联羧甲基壳聚糖(carboxymethylchitosan,CMCS)及重组人源Ⅲ型胶原蛋白(recombinanthumantypeIIIcollagen,RHCⅢ)制备羧甲基壳聚糖重组人源Ⅲ型胶原蛋白凝胶(carboxymethylchitosan/recombinanthumantypeIIIcollagenHydrogel,CMCS/RHCⅢHydrogel)。傅里叶红外光谱仪(Fouriertransforminfraredspectroscopy,FTIR)检测其特征基团、扫描电镜(scanningelectronmicroscope,SEM观察结构、细胞增殖毒性实验(CCK-8法)检测生物相容性、体内实验观察其在大鼠子宫的降解时间。在大鼠(n=30)妊娠19天时建立剖宫产模型,采用自身对照法分别处理两侧剖宫产创面,左侧子宫为羧甲基壳聚糖重组人源Ⅲ型胶原蛋白凝胶组(CMCS/RHCⅢHydrogel),右侧子宫为空白对照组(Control)。于术后第5、10、15天时随机选取10只大鼠处死、观察切口并进行取材,标本进行HE染色与Masson染色评估子宫结构恢复情况,CD34与CTGF免疫荧光染色评估新生血管密度、F-actin与α-SMA免疫荧光染色评估收缩蛋白表达水平。<br> 结果:成功制备的羧甲基壳聚糖重组人源Ⅲ型胶原蛋白凝胶呈绿色胶冻样,质地均匀,具有一定的粘性、流动性和弹性。傅里叶红外光谱发现酰胺键是CMCS/RHCⅢ凝胶的特征基团。扫描电镜观察CMCS/RHCⅢ凝胶冻干显微结构呈网状多孔样,平均孔径为12.30±0.50μm。不同浓度(20%,40%,60%,80%,100%)的羧甲基壳聚糖重组人源Ⅲ型胶原蛋白凝胶冻干浸提液与人子宫内膜基质细胞共孵育,CCK-8法检测细胞相对活力未见明显下降(P>0.05)。凝胶在大鼠子宫降解的时间为5~10天。动物实验结果显示使用凝胶处理的剖宫产创面愈合更好。HE染色提示使用凝胶处理的子宫结构恢复更快,Masson染色提示第15天时CMCS/RHCⅢ凝胶组子宫切口处胶原容积分数明显高于Control组(64.79±5.41%vs54.23±2.60%,P<0.01),胶原沉积增加19.35±4.27%;免疫荧光染色提示第10天时半定量分析CD34荧光强度高于Control组(41.43±8.02%vs32.94±4.20%,P<0.05)。CTGF荧光强度高于Control组(48.81±7.38%vs35.42±7.01%,P<0.05);第15天时CMCS/RHCⅢ凝胶组切口处F-actin荧光强度高于Control组(50.61±16.93%vs36.05±5.89%,P<0.05)。CMCS/RHCⅢ凝胶组与正常组织α-SMA比值明显高于Control组切口处与正常组织α-SMA比值(85.49±6.74%vs67.91±3.63%,P<0.01)。<br> 结论:成功制备羧甲基壳聚糖重组人源Ⅲ型胶原蛋白凝胶,该凝胶具有良好的体内降解性及生物相容性,能有效促进大鼠剖宫产子宫切口愈合。
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