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基于信号放大策略的电化学生物传感器用于肺癌生物标志物的检测研究

摘要迄今为止,肺癌是当前世界上对人类健康最具威胁性的癌症之一,具有极高的发病率和极低的生存率。根据病理学特征的不同,可将其<br>  分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)两个大类。当前,肺癌的临床诊断和检测可以通过影像学检查、组织活检以及免疫学诊断等方法实现。然而,这些方法存在一定的局限性,例如使用的设备仪器昂贵、检查时对机体存在创伤性以及需要专业人员操作等。核酸(DNA或RNA)不仅可以携带生命体内的遗传信息,还具有易于修饰合成、选择性高、亲和力强的特点,可用于构筑具有多种功能的生物材料。基于此,本研究采取多重增强信号的策略构建了电化学适体传感器和DNA水凝胶双通道电化学传感器用于小细胞肺癌和非小细胞肺癌相关生物标志物(NSE和ctDNA)的定量检测和分析。具体的研究内容如下:<br>  第一部分基于功能化ZnO和镍锰双金属氧化物构建电化学适体传感器用于小细胞肺癌NSE的检测分析研究<br>  目的:构建基于纳米复合物实现信号增强的电化学适体传感器用于NSE的分析研究。方法:首先,氧化锌(ZnO)掺杂聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)功能化氮掺杂碳纳米管(N-CNTs)合成新型复合材料(N-CNTs/P/ZnONFs)作为传感界面。该复合材料不仅使电极表面的比表面积增大,还提高了传感器的电子传导速率。电沉积金纳米子之后为捕获探针(BCPs)提供丰富的结合位点,并实现放大信号。其次,修饰有PtNPs的三元金属氧化物(Ni6MnO8@AB)不仅作为信号探针载体捕获大量的信号探针(TSPs),在-0.2V的电压下还可以协同催化H2O2转化为H2O2和O2,产生较强的i-t信号实现进一步信号放大。NSE存在时可与BCPs、TSPs特异性识别并结合在修饰电极表面,完成夹心型电化学适体传感器的构建。用i-t记录不同浓度的NSE的信号响应情况。结果:基于无酶协同催化构建的电化学适体传感器在10fgmL?1?100ngmL?1浓度范围内,NSE的浓度对数与i-t信号之间呈现良好的线性关系,检测限为4.86fgmL?1;平均加标回收率为95.3%?106.5%;RSD为2.24%?4.60%。结论:制备的电化学适体传感器展现出良好的响应性和灵敏性,并且在临床真实样本检测中具有一定的应用潜力。<br>  第二部分基于DNA自组装水凝胶构建的双模通道电化学传感器用于非小细胞肺癌ctDNA的检测分析研究<br>  目的:基于DNA自组装水凝胶的设计双模通道电化学传感器用于灵敏检测循环肿瘤基因EGFRL858R(ctDNAEGFRL858R)。方法:首先,三条能两两互补配对的单链DNA(ssDNA)杂交形成“Y型”DNA纳米结构(Y单元),本研究构建了两条具有不同粘性末端的Y单元,并以ctDNA作为交联剂与不同Y单元的粘性末端互补杂交,从而在电极表面自组装生成对电子传递具有阻碍作用的水凝胶,目标物的浓度越高,对电子传递的阻碍作用越强。其次,将电活性物质甲苯胺蓝(Tb)封装在自组装形成的DNA水凝胶中,目标物的浓度越高,封装的Tb越多。并用差分脉压伏安法(DPV)记录不同浓度的ctDNA的信号响应情况。基于此构建了信号放大型双通道电化学生物传感器用于对ctDNA的检测分析。结果:双通道生物传感器在100fM~100nM检测范围内,目标物的浓度对数与电化学信号均呈现出良好的线性关系,检测限分别为8.08fM和33.10fM,平均加标回收率为分别为89.9%?104.0%和95.2%?110.0%,RSD分别为1.50%?4.59%,1.82%?4.89%。结论:这项工作利用DNA水凝胶自组装构建了信号放大型双通道电化学生物传感器为检测ctDNA提供了一种可行的新方法。

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