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基于金属有机框架的电化学生物传感器的构建及其对乳腺癌标志物HER2的应用研究

摘要人表皮生长因子受体2(HER2)是一种参与细胞信号通路的受体酪氨酸激酶。HER2的过度表达发生在大约20-30%的乳腺癌症肿瘤中,这表明了HER2检测的重要性,因此,血液中HER2的浓度是乳腺癌诊断、治疗、恶性程度评估、预后以及复发的重要指标之一。目前,HER2检测技术主要涉及酶联免疫吸附法、免疫组化等。但这些方法存在复杂的操作步骤、特异性低、分析成本高、仪器昂贵等缺点。而电化学生物传感器具有简单、高效、成本低,响应速度快,具有小型化潜力的特点,因而广泛应用于癌症标志物检测和疾病诊断。因此,本研究设计并构建了两种基于金属有机框架的电化学免疫传感器,并用于定量检测和分析乳腺癌生物标志物(HER2)的方法,研究内容的具体如下:<br>  第一部分基于La-MOF-PbO2纳米复合物的电化学免疫传感器的构建及其对乳腺癌标志物HER2的检测<br>  目的:构建基于La-MOF-PbO2纳米复合物的夹心型免疫传感器对于乳腺癌标志物HER2的检测。方法:首先以TB/AuNPs/La-MOF-PbO2复合材料为电活性探针,PEI-MoS2NFs作为传感平台,所制备的HER2的夹心型电化学免疫传感器。其次,大量的一抗(Ab1)通过Au-N键固定在电沉积金的PEI-MoS2NFs表面。在HER2存在下,被二抗(Ab2)修饰的TB/AuNPs/La-MOF-PbO2电活性探针可以通过抗原抗体的特异性结合形成夹层结构固定在生物传感器的界面上,从而产生显著的电化学信号。结果:所构建的基于La-MOF-PbO2和PEI-MoS2NFs的双重信号放大策略的三明治型免疫传感器在100fgmL-1~10μgmL-1之间表现出良好的线性关系,R2为0.9994;检测限为15.64fgmL-1;平均回收率为93.21%-97.41%;RSD不超过3%。结论:本研究中所得的免疫传感器在临床生物分析中具有潜在的应用前景。<br>  第二部分基于Sm-MOF@KB纳米复合物的电化学免疫传感器的构建及其对乳腺癌标志物HER2的检测<br>  目的:构建基于Sm-MOF@KB纳米复合物的夹心型免疫传感器对于乳腺癌标志物HER2的检测。方法:首先,NiMn-LDH上电沉积金纳米粒子(AuNPs)作为传感检测平台,AuNPs/NiMn-LDH有较大的活性比表面积可作为一抗(Ab1)的附着位点。其次,制备的Sm-MOF@KB复合材料可作为电活性物质亚甲基蓝(MB)和二抗(Ab2)的载体,尤其地,所制备的纳米复合材料具有优异导电性和大比表面积。由于抗原和抗体间存在特异性结合的作用力,所以在HER2存在时,电化学免疫传感器具有明显的电化学信号。结果:所构建的基于Sm-MOF@KB和AuNPs/NiMn-LDH的信号放大策略的夹心型电化学免疫传感器在10fgmL-1~1μgmL-1之间具有良好的线性关系,R2值为0.9975;检测限为5.15fgmL-1(n=5),在20天后,传感器电信号不低于初始值的88.89%。结论:本研究所设计的电化学免疫传感器具有良好的选择性、重现性和稳定性,为临床乳腺癌的检测和诊断提供了一种可行性的方法。

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