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摘要目的：纳米氧化铜（CuONPs）具有优异的物理化学性质，被广泛应用于工业、生物医药等相关领域。纳米氧化铜呼吸暴露后可能穿透气血屏障进入循环系统，造成血管内皮细胞线粒体损伤。线粒体是机体重要的维持氧化应激平衡的细胞器，损伤的线粒体可以通过动态的分裂和融合（线粒体动力学）以及清除异常线粒体的选择性自噬（线粒体自噬）共同维持线粒体稳态平衡。本研究拟探索线粒体动力学异常和线粒体自噬失衡在 CuONPs 呼吸暴露致血管内皮线粒体损伤中的作用及机制。<br>　　方法： CuONPs体外暴露处理 EA.hy926（人脐静脉融合细胞）细胞，免疫荧光实验观察线粒体形态和相关蛋白的定位；透射电镜观察细胞线粒体及自噬小体等超微结构；蛋白免疫印迹实验检测线粒体相关蛋白（p-DRP1，DRP1，Fis1，VDAC1，TIM23，ATP5B）和自噬标志性蛋白（LC3）的表达水平；流式细胞术检测细胞活性及线粒体ROS；MTS实验检测细胞活性。选取7-8周龄、体重20 g左右的雄性 C57BL/6J小鼠并随机分为对照组、CuONPs处理组、尿石素 A（线粒体自噬诱导物）处理组、CuONPs+尿石素 A处理组，每组6只。CuONPs气管滴注3天后，收取小鼠腹主动脉，使用透射电镜实验观察线粒体、自噬小体等超微结构；蛋白免疫印迹实验检测线粒体自噬相关蛋白（TIM23、ATP5B 和 LC3）及氧化应激相关蛋白（HO-1和GCLM）的表达水平。<br>　　结果：（1）CuONPs暴露可诱导血管内皮细胞中线粒体嵴断裂、受损线粒体累积，同时伴随线粒体分裂增加；抗氧化剂NAC可缓解线粒体断裂，而线粒体分裂抑制剂 Mdivi-1可加剧线粒体 ROS的产生及细胞死亡。（2）CuONPs处理后促进ATP5B和LC3共定位和线粒体自噬相关蛋白增加；使用自噬抑制剂（Wort和CQ）进一步上调线粒体自噬相关蛋白，并加剧受损线粒体累积。（3）CuONPs暴露后PINK1蛋白增加、并且与线粒体共定位增加；敲低 PINK1可加剧受损线粒体累积、上调线粒体 ROS和促进细胞死亡；（4）CuONPs 暴露后LC3、Mito-DsRed和TAX1BP1共定位，TAX1BP1是连接泛素化线粒体和自噬体的主要货运受体；敲低TAX1BP1后受损线粒体累积增多、线粒体ROS增加、细胞死亡明显增高；（5）尿石素A可促进 LC3 与 Mito-DsRed、PINK1 与 Mito-DsRed 的共定位，缓解CuONPs 暴露诱导的受损线粒体累积、线粒体 ROS的产生以及细胞死亡；（6）CuONPs 可诱导小鼠腹主动脉线粒体分裂蛋白 Fis1 以及线粒体自噬相关蛋白TIM23，ATP5B和LC3B的增加；尿石素A可缓解血管中受损线粒体的累积并抑制氧化应激相关蛋白 HO-1 和GCLM的增加。<br>　　结论：（1）CuONPs暴露诱导血管内皮细胞氧化应激增加进而扰乱血管内皮细胞线粒体动力学平衡、使线粒体分裂增加及受损线粒体累积。线粒体分裂对 CuONPs 诱导的细胞毒性有缓解作用。（2） CuONPs暴露可激活线粒体自噬，清除受损线粒体，使用自噬抑制剂可加剧 CuONPs诱导的细胞毒性。线粒体自噬可缓解 CuONPs暴露诱导的细胞毒性。（3）CuONPs可激活PINK1/TAX1BP1依赖的线粒体自噬，敲低 PINK1以及 TAX1BP1可加剧 CuONPs诱导的细胞死亡、线粒体ROS的产生及受损线粒体的累积。（4）尿石素A可激活PINK1依赖的线粒体自噬，促进CuONPs暴露诱导的线粒体ROS和受损线粒体的清除。（5）尿石素 A可缓解 CuONPs诱导的血管内皮损伤。