摘要目的:<br> 本文拟研究在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠乳鼠心肌成纤维细胞增殖实验中I型胶原(COL1A1)、Ⅲ型胶原(COL3A1)、延长因子复合物亚基2(ELP2)、信号转导子与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)表达情况及缬沙坦干预后待测指标表达量的变化情况,探讨ELP2是否通过调控p-STAT3的表达影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖。<br> 方法:<br> 使用差速贴壁及胰酶消化法分离纯化1-3日龄C57BL/6小鼠乳鼠的心肌成纤维细胞,倒置显微镜下对心肌成纤维细胞进行形态学鉴定,并继续于心肌成纤维细胞完全培养基中进行原代细胞的传代培养。取传代后的第二代心肌成纤维细胞,建立AngⅡ刺激心肌成纤维细胞增殖及缬沙坦干预细胞增殖实验,实验分组为:Control组(完全培养基)、AngⅡ0.5组(AngⅡ0.5umol/l)、AngⅡ1.0组(AngⅡ1.0umol/l)、AngⅡ1.0+ARB1.0组(AngⅡ1.0umol/l+缬沙坦1.0umol/l)。培养24小时后,CCK-8检测各组于450nm处的吸光度值(OD值)及细胞增殖率,WesternBlot检测各组心肌成纤维细胞中COL1A1、COL3A1、STAT3、p-STAT3和ELP2蛋白的表达水平;RT-qPCR检测各组COL1A1、COL3A1、STAT3和ELP2mRNA的表达水平。<br> 结果:<br> 1.细胞于1.5h开始贴壁,24h基本贴壁完全,显微镜下观察细胞形态及生长方式符合心肌成纤维细胞特征。<br> 2.CCK-8结果示:与对照组相比,AngⅡ0.5组和AngⅡ1.0组OD值及增值率明显升高(P<0.05);细胞增殖与AngⅡ浓度呈剂量依赖性(P<0.05)。缬沙坦干预后OD值及细胞增值率较AngⅡ1.0组明显下降(P<0.05)。<br> 3.Westernblot结果示:与对照组相比,AngⅡ1.0组COL3A1、STAT3、p-STAT3、ELP2蛋白表达量明显增加(P<0.05);并且随着AngⅡ浓度增加STAT3、ELP2蛋白表达显著增加(P<0.05),同时COL1A1蛋白表达也呈增加趋势,但无统计学意义(P>0.05);缬沙坦干预后COL3A1,STAT3、p-STAT3、ELP2蛋白表达显著减少(P<0.05)。<br> 4.RT-qPCR结果示:与对照组相比,AngⅡ1.0组COL1A1、COL3A1、STAT3mRNA表达量显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);并且随着AngⅡ浓度增加,STAT3mRNA表达量显著增加(P<0.05),ELP2mRNA表达量呈增加趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);加用缬沙坦后COL1A1、STAT3mRNA表达量减少,差异均有统计学意义(P<0.05),COL3A1、ELP2mRNA表达量也呈下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。<br> 结论:<br> (1)AngⅡ可诱导心肌成纤维细胞增殖,并使心肌纤维化标志物(COL1A1、COL3A1)的表达升高。AngⅡ水平越高,促使心肌成纤维细胞增殖的作用越明显。<br> (2)AngⅡ促进心肌成纤维细胞增殖可能与激活STAT3信号转导通路有关,且ELP2可能通过调控STAT3的活化影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖。<br> (3)缬沙坦在一定水平上可阻止AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,并下调心肌纤维化标志物(COL1A1、COL3A1)的表达。
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