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摘要目的采用网络药理学探讨鸡血藤缓解骨癌痛的主要成分及其作用机制,并通过建立细胞炎症模型进一步验证。<br>　　方法第一部分：运用网络药理学和分子对接方法，筛选中药鸡血藤和骨癌痛（bonecancerpain，BCP）的作用靶点，并构建药物-成分-靶点-疾病网络图，筛选得出活性成分和关键靶点，并对关键靶点进行GO和KEGG分析，从而得出相关信号通路。对活性成分和关键靶点进行分子对接评估结合效果。第二部分：基于前期网络药理学分析结果，预测出鸡血藤治疗骨癌痛的主要化合物为木犀草素（Luteolin，LUT）。利用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导BV2小胶质细胞构建炎性细胞模型，共分为对照组、LPS组、LPS+LUT（7.5μmol/L）组、LPS+LUT（15μmol/L）组、LPS+LUT（30μmol/L）组、LPS+LUT（60μmol/L）组。对照组和LPS组加入无血清培养基预处理2h；LPS+LUT（7.5μmol/L）组、LPS+LUT（15μmol/L）组、LPS+LUT（30μmol/L）组、LPS+LUT（60μmol/L）组分别加入含LUT（7.5μmol/L、15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L）的无血清培养基预处理2h；之后对照组加入无血清培养基，其余各组加入含1μg/mL的LPS的无血清培养基，继续孵育24h，收集细胞及上清液用于后续实验。CCK-8法检测LPS及不同浓度LUT对BV2小胶质细胞活性的影响；RT-qPCR法检测各组细胞中典型靶点TNF-α、IL-6、NF-κB和HIF-1α的基因表达情况；ELISA法检测各组细胞上清中TNF-α、IL-6和HIF-1α的含量。<br>　　结果第一部分：网络药理学结果表明鸡血藤和骨癌痛两者的相交靶点共102个；分析结果得出鸡血藤通过共同靶点可作用于骨癌痛的活性成分有22个，其中木犀草素是富集靶点数最多的成分。利用PPI蛋白网络筛选出10个关键靶点：AKT1、EGFR、MAPK1、JUN、MYC、VEGFA、CASP3、IL-6、STAT3和PTGS2；GO富集分析结果：分子功能、生物过程、细胞成分分别达到141、1630、81个；KEGG结果共涉及166条通路,其中涉及到的通路有HIF-1α信号通路；HIF-1α信号通路图上主要富集的典型靶点有IL-6、NF-κB、HIF-1α。分子对接结果表明，核心成分木犀草素与关键靶点具有良好的结合性能。第二部分：通过网络药理学分析结果，体外实验选择木犀草素作用于LPS诱导的小鼠BV2小胶质细胞炎症模型进行关键靶点和通路的初步验证，RT-qPCR和ELISA结果表明：与对照组相比，加入LPS后，LPS组TNF-α、IL-6和HIF-1α的mRNA和蛋白水平明显升高，NF-κB的mRNA的水平明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与LPS组相比，LPS+LUT各浓度组的TNF-α、IL-6和HIF-1α的mRNA和蛋白水平明显降低，NF-κB的mRNA水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；在LUT浓度为7.5μmol/L-30μmol/L的实验浓度范围内抑制作用呈浓度依赖性；LPS+LUT（30μmol/L）组和LPS+LUT（60μmol/L）组差异没有统计学意义（P＞0.05）。<br>　　结论1.本研究利用网络药理学筛选出鸡血藤缓解BCP的核心成分为LUT，并可调节HIF-1α信号通路上典型靶点IL-6、NF-κB、HIF-1α以及TNF-α；2.通过RT-qPCR、ELISA实验初步验证了7.5-30μmol/L浓度范围内的LUT对LPS诱导的BV2细胞炎症反应的抑制作用呈浓度依赖性。