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摘要目的:建立氧诱导视网膜病变（Oxygen-inducedRetinopathy，OIR）小鼠模型，探讨芪灯明目胶囊对血管生成素（Angiopoietin，Ang）/酪氨酸激酶受体Tie2信号通路（Ang/Tie2信号通路）的调控作用以及其对视网膜新生血管（Retinalneovascularization，RNV）的干预效应，明确芪灯明目胶囊治疗RNV的作用机制，为其临床应用提供实验和理论依据。<br>　　方法:取健康新生7天（P7）C57BL/6J幼鼠120只，随机分为OIR模型组100只和正常对照组20只。正常对照组小鼠一直在正常空气环境中饲养，OIR组所有小鼠及其哺乳母鼠在氧气浓度为（75％±2％）的自制玻璃氧舱内饲养5天，至P12时移出氧舱，随机分为模型对照组（OIR组）、芪灯明目胶囊低剂量组、中剂量组和高剂量组以及阳性药物组（Ang1组），然后于正常环境中继续饲养5天至P17，期间予以药物干预。芪灯明目胶囊低、中、高剂量组采取芪灯明目胶囊混悬液（225mg/kg、445mg/kg、900mg/kg）灌胃，Ang1组于P12时予以Ang1(0.05μg，1μl)双眼玻璃体注射一次。所有小鼠于P17时行相关检测：（1）OIR小鼠模型评价及芪灯明目胶囊对RNV的干预效应研究：①制作小鼠眼球组织病理切片HE染色，统计突出内界膜的血管内皮细胞核数目，评价RNV生长情况。②FITC-dextran荧光造影并制作视网膜铺片，直观显示视网膜无灌注区，血管形态、分布及密度；（2）芪灯明目胶囊对小鼠RNV的重塑效应研究：①免疫荧光双染检测视网膜周细胞标志物α-SMA与血管内皮细胞标志物CD31表达与分布，评价视网膜血管周细胞覆盖程度；②免疫组织化学法检测视网膜缺氧诱导因子-1α（Hypoxia-induciblefactor-1α，HIF-1α）和血管内皮钙黏着蛋白<br>　　（Vascularendothelialcadherin，VE-cadherin）的蛋白表达量，评价视网膜组织缺氧情况以及血管完整性。（3）芪灯明目胶囊对Ang/Tie2信号通路的调控作用研究：同时采用免疫组织化学法以及WesternBlot检测小鼠视网膜组织Ang/Tie2信号通路主要成员Ang1、Ang2、Tie2以及其下游信号-磷酸化的蛋白激酶B（P-AKT）和内皮细胞型一氧化氮合酶（Endothelialcellnitricoxidesynthase，eNOS）的蛋白表达量。<br>　　结果:（1）OIR小鼠模型评价以及芪灯明目胶囊对RNV的干预效应研究结果显示：①眼球病理切片HE染色：a.与正常对照组相比，OIR组突破内界膜的血管内皮细胞核数目明显增多（Plt;0.01）；b.与OIR组相比，各治疗组突破内界膜的血管内皮细胞核数目明显减少（Plt;0.01）；c.各治疗组间比较，芪灯明目胶囊三个剂量组之间无统计学差异（Pgt;0.05）；Ang1组突破内界膜的血管内皮细胞核数目少于芪灯明目胶囊高剂量组（Plt;0.05）；②视网膜铺片：视网膜无灌注区面积：OIR组小鼠视网膜无灌注区面积大于正常对照组（Plt;0.05）；芪灯明目胶囊各剂量组无灌注区面积和OIR组无统计学差异（Pgt;0.05）；Ang1组无灌注区面积小于OIR组（Plt;0.05）。视网膜新生血管密度：OIR组小鼠视网膜新生血管密度大于正常对照组（Plt;0.05）；芪灯明目胶囊中、高剂量组以及Ang1组视网膜新生血管密度小于OIR组（Plt;0.05）。视网膜总血管密度：各组间视网膜总血管密度不具备统计学差异（F=1.044，P=0.411）。<br>　　（2）芪灯明目胶囊对小鼠RNV的重塑效应研究结果：①免疫荧光检测CD31与α-SMA：a.与正常对照组相比，OIR组CD31平均荧光强度显著升高（Plt;0.01），α-SMA平均荧光强度显著降低（Plt;0.01）；b.与OIR组相比，各治疗组CD31表达减少（Plt;0.05），芪灯明目胶囊中剂量组α-SMA水平增高（Plt;0.05），芪灯明目胶囊高剂量组与Ang1组α-SMA水平显著增高（Plt;0.01）；c.各治疗组间比较，芪灯明目胶囊三个剂量组存在剂量效应关系，低剂量组与高剂量组CD31和α-SMA水平存在显著差异（Plt;0.01），中、高剂量组α-SMA水平存在显著差异（Plt;0.01），高剂量芪灯明目胶囊组与Ang1组的CD31和α-SMA水平均相当（Pgt;0.05）。②免疫组织化学法检测视网膜HIF-1α和VE-cadherin表达：a.与正常对照组相比，OIR组HIF-1α表达增加（Plt;0.05)，VE-cadherin表达减少（Plt;0.05）；b.与OIR组相比，芪灯明目胶囊中剂量组VE-cadherin增高（Plt;0.05）；芪灯明目胶囊高剂量组VE-cadherin表达增高（Plt;0.05），HIF-1α减少（Plt;0.05）；Ang1组HIF-1α减少（Plt;0.05），VE-cadherin显著升高（Plt;0.01）；c.各治疗组间比较，芪灯明目胶囊各剂量组不存在剂量效应关系（Pgt;0.05）；芪灯明目胶囊高剂量组HIF-1α和VE-cadherin表达水平与Ang1组相当（Pgt;0.05）。<br>　　芪灯明目胶囊对Ang/Tie2信号通路的调控作用研究结果：①免疫组织化学法检测结果：a.与正常对照组相比，OIR组Ang1无明显变化（Pgt;0.05），Ang2显著增加（Plt;0.01），Tie2表达减少（Plt;0.05），P-AKT和eNOS显著减少（Plt;0.01）；b.与OIR组相比，芪灯明目胶囊低剂量组Ang1增高（Plt;0.05），Ang2减少（Plt;0.05）；芪灯明目胶囊中剂量组Ang2减少（Plt;0.05），P-AKT和eNOS增高（Plt;0.05）；芪灯明目胶囊高剂量组Ang2减少（Plt;0.05），Tie2和P-AKT增高（Plt;0.05），Ang1和eNOS显著升高（Plt;0.01）；Ang1组Ang2无明显变化（Pgt;0.05），Tie2和P-AKT增高（Plt;0.05），Ang1和eNOS显著升高（Plt;0.01）；c.各治疗组间比较，芪灯明目胶囊仅低剂量与高剂量组的Ang1、Tie2、P-AKT和eNOS表达有统计学差异（Plt;0.05），Ang1组eNOS表达水平较芪灯明目胶囊高剂量组升高，具有统计学差异（Plt;0.05)；其余各组间比较无统计学差异（Pgt;0.05）。<br>　　②Western-Blot检测结果：a.OIR组较正常对照组Ang2明显增加（Plt;0.01)，Ang1、Tie2、P-AKT明显减少（Plt;0.01)；b.与OIR组相比，芪灯明目胶囊低剂量组Ang2表达减少（Plt;0.05)；芪灯明目胶囊中剂量组Ang2表达减少（Plt;0.05)，Ang1表达增加（Plt;0.05)；芪灯明目胶囊高剂量组Ang2表达明显减少（Plt;0.01)，P-AKT表达增加（Plt;0.05)，Ang1和Tie2明显增加（Plt;0.01)；Ang1组Ang2表达明显减少（Plt;0.01)，P-AKT表达增加（Plt;0.05)，Ang1和Tie2明显增加（Plt;0.01)；c.各治疗组间比较，芪灯明目胶囊低/高剂量组以及中/高剂量组Ang2存在统计学差异（Plt;0.05)，低/高剂量组Tie2表达存在统计学差异（Plt;0.05)，其余各组间比较无统计学差异（Pgt;0.05)。总的来说，WesternBlot和免疫组化法检测结果大致相同，仅eNOS的表达存在较大差异，这里以WesternBlot检测的结果为准。<br>　　结论:<br>　　（1）芪灯明目胶囊能抑制OIR小鼠RNV形成。<br>　　（2）芪灯明目胶囊能增加OIR模型小鼠视网膜血管周细胞覆盖，下调HIF-1α表达，增加VE-cadherin水平，促进视网膜血管成熟，缓解视网膜缺氧，增加血管的完整性，且存在剂量效应关系。<br>　　（3）芪灯明目胶囊能上调Ang1、Tie2、P-AKT表达，下调Ang2表达，且具有剂量效应关系。通过调控Ang/Tie2信号通路，抑制RNV形成，并促进新生血管成熟重塑，保护视网膜功能。