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摘要目的：研究回生散组分配伍治疗胃溃疡的药效、最佳配伍、配伍效应和作用机制。<br>　　方法：1.回生散治疗胃溃疡的药效和组分最佳配伍研究：制备回生散水煎液、回生散主要组分挥发油，将回生散水煎液、主要组分挥发油及其不同比例的藿香挥发油、陈皮挥发油组分配伍（简称藿陈比）1:2、2:1、1:1，均给予灌胃大鼠，给药7d后以束水应激法建立大鼠急性胃溃疡模型。肉眼观察胃黏膜损伤情况，测定胃液pH值；苏木精-伊红染色（Hematoxylineosinstain，HE）观察胃黏膜组织形态学变化；酶联免疫吸附（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）法检测大鼠血清胃泌素（Gastrin，GAS）、胃蛋白酶原C（PepsinogenC，PGC）、前列腺素E2（ProstaglandinE2，PGE2）、五-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）5-HT的含量。<br>　　2.回生散组分配伍抗胃溃疡的机制研究：获得回生散组分治疗胃溃疡的最佳配比后，以该配比设定高、中、低剂量组（600mg/kg、300mg/kg、150mg/kg）灌胃给予大鼠连续7d，仍以束水应激法建立大鼠急性胃溃疡模型，观察回生散组分配伍对胃黏膜损伤和组织形态学、胃酸pH值的影响，ELISA检测血清GAS、PGC、PGE2、P物质（SubstanceP，SP）、胆囊收缩素（Cholecy-stokinin，CCK）、胃动素（Motilin，MTL）、环磷酸腺苷（Cyclicadenosinemonophosphate，cAMP）和环磷酸鸟苷（Cyclicguanosinemonophosphate，cGMP）含量；免疫组化法（Immunohistochemical，IHC）检测胃组织表皮生长因子（EpidemalGrowthFactor，EGF）、三叶因子2（Trefoilfactorfamily2，TFF2）蛋白表达；蛋白印迹法（Westernblot，WB）检测胃组织c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminalkinase,JNK）、p-JNK、p53、Bax、Caspase-3蛋白表达；透射电镜观察各组胃主细胞及壁细胞超微形态结构的变化。<br>　　3.回生散组分配伍调节大鼠胃酸分泌的研究：采用最佳配比的高、中、低三个剂量灌胃正常大鼠7d后，皮下注射组胺诱导大鼠胃酸分泌，采用结扎幽门法收集胃液，检测各组大鼠胃酸分泌量和pH值，采用试剂盒测定胃组织H+-K+-ATP酶活力。<br>　　4.回生散组分配伍保护胃黏膜上皮细胞GES-1损伤机制研究：体外培养人胃黏膜上皮细胞GES-1，采用乙醇诱导细胞损伤模型，给予回生散组分25μg/mL作用24h后，噻唑蓝（Methylthiazolyltetrazolium，MTT）比色法检测回生散组分及配伍对细胞活力及形态的影响；试剂盒测定细胞活性氧（Reactiveoxygenspecies，ROS）、谷胱甘肽（Glutathione，GSH）、超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）含量或活性；流式细胞术检测细胞凋亡率；WB检测细胞JNK、p-JNK、c-Jun、p53、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达；RT-qPCR检测细胞JNK、c-Jun、p53、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8mRNA表达。<br>　　结果：<br>　　1.回生散及组分配伍对急性胃溃疡大鼠的影响束水应激法制备大鼠急性胃溃疡模型成功，模型组大鼠可见胃黏膜明显出血、糜烂和溃疡。与空白组相比，模型组大鼠胃黏膜病理损伤评分显著升高，血清GAS、PGC含量显著增高，PGE2含量显著降低（P＜0.01）。与模型组相比，藿陈2:1组、藿陈1:1组大鼠胃黏膜病理损伤评分降低（P＜0.05），藿陈1:2组大鼠病理胃黏膜病理损伤评分显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，各治疗组大鼠血清GAS含量均显著降低（P＜0.01），藿陈1:2组还能降低大鼠血清PGC含量，提高PGE2含量（P＜0.05）；与水煎液组相比，藿陈1:2组对大鼠GAS、PGC、PGE2的影响更为显著（P＜0.05或0.01）；当广藿香挥发油和陈皮挥发油1:2配伍时，在缓解胃黏膜病理损伤、降低血清GAS含量、提高PGE2含量方面发挥协同的配伍效应（Q＞1.15）。<br>　　2.回生散组分配伍（藿陈）1:2对大鼠急性胃溃疡的机制研究结果与空白组相比，模型组大鼠胃液pH值显著降低，胃黏膜病理损伤评分显著升高（P＜0.01），血清GAS、PGC、SP、CCK含量和cAMP/cGMP值升高（P＜0.05或0.01），PGE2含量显著降低（P＜0.01），胃组织EGF和TFF2蛋白表达显著降低（P＜0.01），胃组织p-JNK、p53、Bax和Caspase-3蛋白的相对表达升高（P＜0.05或0.01）。与模型组相比，藿陈1:2高剂量组能显著提高大鼠胃液pH值（P＜0.01），降低血清GAS、SP含量（P＜0.05），显著降低血清PGC、CCK含量和cAMP/cGMP值（P＜0.01），显著提高胃组织EGF、TFF2蛋白表达（P＜0.01），抑制胃组织p-JNK蛋白相对表达（P＜0.05）；与模型组相比，藿陈1:2中剂量组能显著提高大鼠胃液pH值（P＜0.01），降低大鼠胃黏膜病理损伤评分（P＜0.05），降低血清GAS、PGC、SP含量（P＜0.05），显著降低血清CCK含量和cAMP/cGMP值（P＜0.01），显著提高胃组织EGF、TFF2蛋白表达（P＜0.01），抑制胃组织p-JNK蛋白相对表达（P＜0.05）以及p53、Bax和Caspase-3蛋白相对表达（P＜0.01）；与模型组相比，藿陈1:2低剂量组能降低大鼠血清GAS、PGC含量（P＜0.05），显著降低血清CCK含量和cAMP/cGMP值（P＜0.01），提高胃组织EGF、TFF2蛋白表达（P＜0.05），抑制胃组织p53蛋白相对表达（P＜0.05）和p-JNK、Bax和Caspase-3蛋白相对表达（P＜0.01）；不同剂量组中以中剂量组（300mg/kg）效果最好，且电镜检测显示，该剂量可明显纠正急性胃溃疡模型大鼠胃主细胞的内质网扩张，减轻线粒体肿胀、膜丢失和嵴融合等损伤，从而抑制胃壁细胞内分泌小管活性，减少胃酸分泌。<br>　　3.回生散藿陈1:2配伍对大鼠胃酸分泌功能的影响与正常组比较，模型组大鼠经皮下注射组胺后胃液分泌量显著增加（P＜0.01），胃液pH值显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，回生散藿陈1:2配伍能显著减少胃液体分泌量（P＜0.01）和提高胃液pH值（P＜0.05），并能显著抑制胃组织H+-K+-ATP酶活力（P＜0.05）；且藿陈1:2配伍组在提高胃液pH值和抑制大鼠H+-K+-ATP酶活力的作用明显优于组分单独使用组（P＜0.01）。<br>　　4.回生散组分配伍对胃上皮细胞损伤的保护机制结果藿陈1:2配伍在25μg/mL时能抑制乙醇诱导的GES-1细胞损伤；与空白组相比，模型组细胞形态较差，贴壁细胞减少，ROS信号表达增强，GSH含量显著降低，细胞凋亡率显著升高（P＜0.01），细胞p-JNK、c-Jun、p53、Caspase-3、Caspase-8蛋白相对表达增强，Bcl-2蛋白表达降低，JNK、Bax、Caspase-3、Caspase-8mRNA相对表达增强，Bcl-2mRNA相对表达降低（P＜0.05或0.01）。与模型组相比，回生散组分配伍治疗后的GES-1细胞ROS水平降低，GSH、MOD含量显著增高（P＜0.01）；与模型组相比，回生散组分藿陈1:2配伍能降低乙醇诱导的GES-1细胞凋亡率（P＜0.05），降低细胞p-JNK、p53、Caspase-3、Caspase-8蛋白相对表达，提高Bcl-2蛋白相对表达，并能抑制JNK、Bax、Caspase-3、Caspase-8mRNA相对表达，显著提高Bcl-2mRNA相对表达（P＜0.05或0.01）。<br>　　结论：1.回生散对急性胃溃疡具有治疗作用，挥发油是其主要药效物质，回生散组分挥发油治疗胃溃疡效果优于水煎液，最佳配伍比例是藿陈1:2，且广藿香、陈皮的挥发油配伍的治疗效果优于两个挥发油单独使用。<br>　　2.回生散组分配伍治疗胃溃疡的机制与抑制胃酸分泌，提高胃黏膜防御能力，促进溃疡愈合和通过抑制细胞凋亡保护胃黏膜上皮细胞损伤有关。