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摘要在细胞周期的不同阶段，细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs）在细胞周期中发挥着核心调控的作用。细胞周期失调是恶性肿瘤的一个共同特征，常表现为异常增殖。黑素瘤是人类和动物常发生于皮肤的一种侵袭性恶性肿瘤，有的动物如牛还见于内脏器官。细胞周期蛋白依赖性激酶2（Cyclin-Dependent Kinase2，CDK2）在细胞分裂、DNA复制、DNA损伤和修复以及细胞周期检查点中具有关键作用。本研究旨在筛选和纯化分子量小的CDK2单域抗体，并对其在检测方面的应用和在黑素瘤细胞中的作用鉴定，为细胞生物学基础性实验研究以及临床的应用提供材料。<br>　　1.本研究利用噬菌体展示技术，利用CDK2多肽淘选羊驼源黑素瘤B16细胞的单域抗体噬菌体文库，并应用酶联免疫反应（ELISA）筛选出阳性单克隆菌株，经PCR及测序进行验证，以筛选CDK2单域抗体菌株。<br>　　2.根据CDK2单域抗体的序列构建原核表达质粒，转化至BL21感受态中，经菌液PCR检测并测序；进行小剂量诱导表达后，Western Blot检测特异性条带，ELISA检测其亲和力为0.0325μg/mL，表明成功构建CDK2单域抗体表达质粒。<br>　　3.对CDK2单域抗体进行蛋白纯化，经SDS-PAGE和Western Blot检测，确定为CDK2单域抗体，并将其应用于Western Blot和免疫组织化学中，在胞质和胞核中能检测到免疫阳性信号。<br>　　4.培养黑素瘤B16细胞，并使用CCK-8和划痕愈合法检测不同浓度的CDK2单域抗体在不同时间对B16细胞增殖和迁移的影响及其可能的机制，试验结果发现，CDK2单域抗体结合细胞中CDK2通过调控GSK-3β、MYC、AKT的表达对B16细胞的增殖和迁移具有一定的抑制作用。<br>　　结论：本试验获得的高亲和力的羊驼源CDK2单域抗体可作为一抗应用于Western Blot与免疫组织化学技术，以检测组织细胞中CDK2的表达；CDK2单域抗体在一定浓度和时间依赖下能够抑制B16的增殖和迁移，为抑制黑素瘤发展的临床应用提供工具。