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摘要动脉粥样硬化(AS)是一种慢性进行性疾病，是心血管疾病发生的病理基础，可于大、中动脉血管中形成。炎症反应贯穿AS发展的始终，抗炎治疗是目前防治AS重要治疗方法。自噬是细胞内存在的一种“自食”现象，对维持细胞内环境稳定和正常的生理功能十分重要。巨噬细胞为AS斑块中的主要炎性细胞，巨噬细胞的自噬功能在AS的防治中发挥重要作用。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)是一种重要的信号通路，可以调节细胞自噬，从而影响AS进程。小檗碱(BBR)可从黄连、黄柏等植物中提取，是一种异喹啉类生物碱，可通过调脂、抑制炎症反应、抗氧化应激、改善血管内皮功能障碍等多途径防治AS。BBR是否能通过调控PI3K/Akt通路来促进巨噬细胞自噬，减轻炎症反应，有待深入研究。<br>　　目的：<br>　　本研究用脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症反应建立细胞模型，探讨BBR是否能够通过调控PI3K/Akt信号通路，促进巨噬细胞自噬，减轻炎症反应，为BBR防治AS提供潜在的理论依据。<br>　　方法：<br>　　1.本研究通过分离ApoE-/-小鼠RAW264.7巨噬细胞，以LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应建立细胞模型。<br>　　2.细胞的分组与处理：共分为7组：①空白对照组：只加1640细胞培养基；②LPS组：加LPS200μg·ml-1培养48h；③PI3K-siRNA组：30nmol·L-1PI3K-siRNA预处理1h，加入BBR100μmol·L-1预处理1h后，后再加LPS200μg·ml-1共培养48h；④Akt-siRNA组：30nmol·L-1Akt-siRNA预处理1h，加入BBR100μmol·L-1预处理1h后，后再加LPS200μg·ml-1共培养48h；⑤BBR低剂量组：加入BBR25μmol·L-1预处理1h后再加LPS200μg·ml-1培养48h；⑥BBR中剂量组：加入BBR50μmol·L-1预处理1h后再加LPS200μg·ml-1培养48h；⑦BBR高剂量组：加入BBR100μmol·L-1预处理1h后再加LPS200μg·ml-1培养48h。<br>　　3.检测方法及指标：用CCK-8检测巨噬细胞的活力；免疫荧光标记自噬；透射电镜观察RAW264.7巨噬细胞自噬小体的数量；酶联免疫吸附测定(ELISA)检测巨噬细胞培养液中hs-CRP、IL-6、TNF-α水平；蛋白质免疫印迹(Westernblot)检测巨噬细胞p-PI3K、p-Akt、Beclin-1、LC3-II、IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达。<br>　　结果：<br>　　1.BBR对巨噬细胞活力的影响：与空白对照组比较，LPS组巨噬细胞活力显著降低（P＜0.05）；与LPS组比较，BBR中剂量组、BBR高剂量组巨噬细胞活力显著升高（P＜0.05），BBR低剂量组无显著差异（P＞0.05）；与BBR高剂量组比较，PI3K-siRNA组及Akt-siRNA组巨噬细胞活力显著降升高（P＜0.05）。<br>　　2.BBR对巨噬细胞Beclin-1、LC3-II荧光表达的影响：（1）各组巨噬细胞Beclin-1荧光表达水平比较：与空白对照组比较，LPS组巨噬细胞Beclin-1荧光表达显著降低（P＜0.05）；与LPS组比较，BBR中剂量组、BBR高剂量组巨噬细胞Beclin-1荧光表达显著升高（P＜0.05），BBR低剂量组无显著差异（P＞0.05）；与BBR高剂量组比较，PI3K-siRNA组及Akt-siRNA组巨噬细胞Beclin-1荧光表达显著升高（P＜0.05）。（2）各组巨噬细胞LC3-II荧光表达水平比较：与空白对照组比较，LPS组巨噬细胞LC3-II荧光表达显著降低（P＜0.05）；与LPS组比较，BBR中剂量组、BBR高剂量组巨噬细胞LC3-II荧光表达显著升高（P＜0.05），BBR低剂量组无显著差异（P＞0.05）；与BBR高剂量组比较，PI3K-siRNA组及Akt-siRNA组巨噬细胞LC3-II荧光表达显著升高（P＜0.05）。<br>　　3.BBR对巨噬细胞自噬小体数量的影响：与空白对照组比较，LPS组巨噬细胞自噬小体数量显著减少（P＜0.05）；与LPS组比较，BBR中剂量组、BBR高剂量组巨噬细胞自噬小体数量显著增加（P＜0.05），BBR低剂量组无显著差异（P＞0.05）；与BBR高剂量组比较，PI3K-siRNA组及Akt-siRNA组巨噬细胞自噬小体数量显著增加（P＜0.05）。<br>　　4.BBR对巨噬细胞培养液中IL-6、TNF-α、hs-CRP水平的影响：与空白对照组比较，LPS组巨噬细胞培养液中IL-6、TNF-α、hs-CRP水平显著增加（P＜0.05）；与LPS组比较，BBR中剂量组、BBR高剂量组巨噬细胞培养液中IL-6、TNF-α、hs-CRP水平显著降低（P＜0.05），BBR低剂量组无显著差异（P＞0.05）；与BBR高剂量组比较，PI3K-siRNA组及Akt-siRNA组巨噬细胞培养液中IL-6、TNF-α、hs-CRP水平显著降低（P＜0.05）。<br>　　5.BBR对巨噬细胞p-PI3K、p-Akt、Beclin-1、LC3-II、IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达的影响：（1）各组巨噬细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平比较：与空白对照组比较，LPS组巨噬细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著增加（P＜0.05）；与LPS组比较，BBR中剂量组、BBR高剂量组巨噬细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低（P＜0.05），BBR低剂量组无显著差异（P＞0.05）；与BBR高剂量组比较，PI3K-siRNA组及Akt-siRNA组巨噬细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低（P＜0.05）。（2）各组巨噬细胞Beclin-1、LC3-II蛋白表达水平比较：与空白对照组比较，LPS组巨噬细胞Beclin-1、LC3-II蛋白表达显著降低（P＜0.05）；与LPS组比较，BBR中剂量组、BBR高剂量组巨噬细胞Beclin-1、LC3-II蛋白表达显著增加（P＜0.05），BBR低剂量组无显著差异（P＞0.05）；与BBR高剂量组比较，PI3K-siRNA组及Akt-siRNA组巨噬细胞Beclin-1、LC3II蛋白表达显著增加（P＜0.05）。（3）各组巨噬细胞IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达水平比较：与空白对照组比较，LPS组巨噬细胞IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达显著增加（P＜0.05）；与LPS组比较，BBR中剂量组、BBR高剂量组巨噬细胞IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达显著降低（P＜0.05），BBR低剂量组无显著差异（P＞0.05）；与BBR高剂量组比较，PI3K-siRNA组及Akt-siRNA组巨噬细胞IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达显著降低P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　1.BBR可显著减轻LPS对巨噬细胞活力的抑制作用，并显著降低由LPS诱导巨噬细胞分泌IL-6、TNF-α、hs-CRP水平及巨噬细胞IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达，减轻炎症反应。<br>　　2.BBR可显著增加由LPS诱导巨噬细胞Beclin-1、LC3-II荧光和蛋白表达，并显著增加巨噬细胞自噬小体数量，促进巨噬细胞自噬。<br>　　3.BBR可显著降低巨噬细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达，抑制PI3K/Akt信号通路，促进巨噬细胞自噬，抑制炎症反应。<br>　　4.BBR能剂量依赖性地抑制PI3K/Akt信号通路，促进巨噬细胞自噬，减轻炎症反应。