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摘要目的：实验发现PI3K/Akt信号通路可以激活巨噬细胞自噬，减少炎症因子的过量分泌而抑制AS进程。多项研究发现一些中药有效提取物--小檗碱(berberine，Ber)具有显著的抗AS作用,但Ber能否通过调控PI3K/Akt通路，促进巨噬细胞自噬，减轻炎症反应，增加易损斑块的稳定性从而发挥抗AS形成的功效，目前尚未阐明。本课题着眼于PI3K/Akt通路、巨噬细胞自噬及炎症反应，探讨Ber抗AS的作用及其干预机制，以期为中医药防治AS提供新的研究思路。<br>　　方法：选用普通饲料喂养雄性小鼠作为①空白对照组，共10只，另选高脂饲料喂养雄性载脂蛋白E缺陷（ApoE-/-）小鼠创建AS动物模型，随机分为7组，10只/组。依次为：②AS模型组、③LY294002组、④triciribine组、⑤辛伐他汀组、⑥Ber低剂量组、⑦Ber中剂量组、⑧Ber高剂量组。③组给予Ber7.5mg·kg-1·d-1灌胃后再给予PI3K抑制剂LY294002（2mgLY294002溶解于DMSO加0.25mLPBS）腹腔注射8周，④组给予Ber7.5mg·kg-1·d-1灌胃后给予Akt抑制剂triciribine（1mg·kg-1·d-1）再灌胃8周，⑤组给予辛伐他汀药液溶剂（5mg/kg·d-1），连续灌胃8周，⑥、⑦、⑧组分别给予Ber2.5、5、7.5mg·kg-1·d-1三种浓度，连续灌胃8周，①、②组小鼠灌服等剂量生理盐水，1次/日，每次测量体质量1次，实验周期为16周。<br>　　油红O及HE染色观察小鼠AS斑块形态改变，比较每组小鼠主动脉组织脂质蓄积情况及斑块面积百分比；透射电镜观察斑块中巨噬细胞自噬小体含量；Westernblot（蛋白印记法）检测主动脉p-PI3K、p-Akt蛋白、自噬标记物Beclin1、LC3-II蛋白、主动脉炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白的表达水平；ELISA（酶联免疫吸附）检测小鼠血清炎症标记物IL-6、TNF-α、hs-CRP水平，免疫组织化学染色法检测AS斑块内PI3K、Akt的分布。<br>　　结果：<br>　　1.小鼠主动脉AS斑块形态学测定结果：空白对照组小鼠主动脉组织内膜光滑连续，结果完整，内膜未见脂质沉积及AS斑块；AS模型组见小鼠主动脉组织内膜结构不完整，见大量炎性细胞浸润，脂质蓄积，AS斑块形成；与AS模型组相比，LY294002组、triciribine组、辛伐他汀组、Ber中剂量组、Ber高剂量组AS病变得于不同程度的改善，Ber中剂量组AS病变程度与AS模型组类似。<br>　　（1）油红O染色，对照组小鼠主动脉血管未见明显脂质蓄积。与对照组相比，AS模型组小鼠主动脉血管组织脂质蓄积显著增多（P＜0.05）；与AS模型组相比，辛伐他汀组、Ber中剂量组、Ber高剂量组小鼠主动脉血管组织脂质蓄积显著减少（P＜0.05），Ber低剂量组小鼠主动脉血管组织脂质蓄积无显著差异（Pgt;0.05）；与Ber高剂量相比，LY294002组、triciribine组小鼠主动脉血管脂质蓄积显著减少（P＜0.05）。<br>　　（2）HE染色，空白对照组小鼠主动脉血管光滑延续未见AS病灶。与对照组相比，AS模型组小鼠主动脉血管组织AS斑块面积百分比显著增大（P＜0.05）；与AS模型组相比，辛伐他汀组、Ber中剂量组、Ber高剂量组AS斑块面积百分比显著减小（P＜0.05），Ber低剂量组AS斑块面积百分比无显著差异（Pgt;0.05）；与Ber高剂量相比，LY294002组、triciribine组主动脉AS斑块面积百分比显著减小（P＜0.05）。<br>　　2.免疫组织化学染色结果：光镜下观察各切片棕黄色区域PI3K、Akt的阳性表达颗粒，空白对照组小鼠主动脉组织未见AS斑块形成。与对照组相比，AS模型组中小鼠AS斑块内PI3K、Akt的阳性表达颗粒显著增多（P＜0.05）；与AS模型组相比，辛伐他汀组、Ber中剂量组、Ber高剂量组中小鼠AS斑块内PI3K、Akt的阳性表达颗粒显著减少（P＜0.05），Ber低剂量组中小鼠AS斑块内PI3K、Akt的阳性表达颗粒无显著差异（Pgt;0.05）；与Ber高剂量相比，LY294002组、triciribine组中小鼠AS斑块内PI3K、Akt的阳性表达颗粒显著减少（P＜0.05）。<br>　　3.透射电镜下AS斑块中巨噬细胞自噬小体的观察结果：对照组小鼠主动脉组织巨噬细胞中见少量自噬小体。与对照组相比，AS模型组中小鼠AS斑块内自噬小体含量显著减少（P＜0.05）；与AS模型组相比，辛伐他汀组、Ber中剂量组、Ber高剂量组中小鼠AS斑块内自噬小体含量显著增加（P＜0.05），Ber低剂量组小鼠AS斑块内自噬小体含量无显著差异（Pgt;0.05）；与Ber高剂量相比，LY294002组、triciribine组小鼠AS斑块内自噬小体含量显著增加（P＜0.05）。<br>　　4.酶联免疫吸附测定(ELISA)结果：与对照组比较，AS模型组小鼠炎症因子（IL-6、TNF-α、hs-CRP）含量显著上调（P＜0.05）；与AS模型组相比，辛伐他汀组、Ber中剂量组、Ber高剂量组小鼠炎症因子（IL-6、TNF-α、hs-CRP）含量显著下调（P＜0.05），Ber低剂量组小鼠炎症因子（IL-6、TNF-α、hs-CRP）含量无显著差异（Pgt;0.05）；与Ber高剂量相比，LY294002组、triciribine组小鼠炎症因子（IL-6、TNF-α、hs-CRP）含量显著下调（P＜0.05）。<br>　　5.蛋白质免疫印迹(Westernblot)检测结果：<br>　　（1）主动脉血管组织p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平：与对照组相比，AS模型组中小鼠p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著增加（P＜0.05）；与AS模型组相比，辛伐他汀组、Ber中剂量组、Ber高剂量组中小鼠p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著减少（P＜0.05），Ber低剂量组中小鼠p-PI3K、p-Akt蛋白表达无显著差异（Pgt;0.05）；与Ber高剂量相比，LY294002组、triciribine组中小鼠p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著减少（P＜0.05）。<br>　　（2）主动脉炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达水平：对照组小鼠组织标本中炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白少量表达。与对照组相比，AS模型组中小鼠组织标本中炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达显著上调（P＜0.05）；与AS模型组相比，辛伐他汀组、Ber中剂量组、Ber高剂量组中小鼠组织标本中炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达显著下调（P＜0.05），Ber低剂量组小鼠组织标本中炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达无显著差异（Pgt;0.05）；与Ber高剂量相比，LY294002组、triciribine组小鼠组织标本中炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP蛋白表达显著下调（P＜0.05）。<br>　　（3）自噬标记物Beclin1、LC3-II蛋白表达水平：对照组小鼠主动脉组织中见小量Beclin1、LC3-II蛋白表达。与对照组相比，AS模型组中小鼠主动脉组织中Beclin1、LC3-II蛋白表达显著减少（P＜0.05）；与AS模型组相比，辛伐他汀组、Ber中剂量组、Ber高剂量组中小鼠主动脉组织中Beclin1、LC3-II蛋白表达含量显著增加（P＜0.05），Ber低剂量组小鼠主动脉组织中Beclin1、LC3-II蛋白表达无显著差异（Pgt;0.05）；与Ber高剂量相比，LY294002组、triciribine组小鼠主动脉组织Beclin1、LC3-II蛋白表达显著增加（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　小檗碱具有显著抗AS作用，其机制可能与其调控PI3K/Akt信号通路，促进巨噬细胞自噬，降低炎症反应有关。