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摘要研究目的：<br>　　骨质疏松是一种全身性的骨骼疾病，以骨量减少、骨强度降低以及骨小梁丢失为主要特征。近年来研究发现骨质疏松的发生与肌肉功能的衰退有关。肌肉与骨骼以旁分泌或内分泌的方式进行生物化学信号的传递，通过串扰信号机制在更高的水平上发挥作用，共同参与肌骨系统功能的调控。LIFR是由肌肉释放的多功能肌肉因子。研究发现LIFR可参与调节Mapk/Erk、AKT和JAK-STAT等信号通路，进而调控成骨分化进程。但机械应力是否可以通过调控成肌细胞中LIFR的释放来影响骨代谢，尚未见报道。因此本研究将探究机械应力是否可通过调控成肌细胞系C2C12中LIFR的释放，以及牵张后的成肌细胞上清液是否可以促进成骨细胞系MC3T3-E1的成骨分化，为运动防治骨质疏松提供更多理论依据。研究方法：<br>　　1. 成肌细胞系C2C12机械牵张实验：<br>　　C2C12加入成肌诱导分化培养基于95%O2、5%CO2、37℃的培养箱进行培养。每两天进行一次换液，根据细胞生长情况进行传代，当明亮肌管出现将C2C12成肌细胞系以1×105/ml接种到BioFlex 6孔板。待C2C12细胞长至80%左右后使用Flexcell-5000细胞牵张仪对细胞进行牵张干预。其中牵张组分别使用15%牵张强度，0.5Hz，机械牵张1天，干预时间为6小时和10%牵张强度，0.5Hz，机械牵张3天，干预时间为3小时的牵张方案；对照组静置培养。每48小时更换培养液，牵张结束后收集所有组上清液和细胞。通过Real-time PCR检测LIFR以及相关成肌因子Myod1、Mog、Csrp3的表达。使用TCA沉淀法提取上清液中蛋白，随后通过Western blot检测上清液中LIFR表达。<br>　　2. C2C12牵张后上清液干预MC3T3-E1实验：<br>　　MC3T3-E1成骨细胞系加入成骨诱导分化剂于培养箱进行培养。每两天进行一次换液，根据细胞生长情况进行传代，随后种至6孔板进行干预。分为空白对照组（NC组）、阳性对照组（PC组）、0天成肌细胞上清液干预组（0d组）、1天成肌细胞上清液干预组（1d组）和3天成肌细胞上清液干预组（3d组）。NC组：细胞不做任何干预，只更换正常DMEM成骨培养基；PC组：使用成骨诱导分化液培养细胞；0d组：每个孔加入1毫升成骨诱导分化液和1毫升上一实验收集的静置组C2C12上清液；1d组：每个孔加入1毫升成骨诱导分化液和1毫升上一实验收集的牵张1天 C2C12上清液；3d组：每个孔加入1毫升成骨诱导分化液和1毫升上一实验收集的牵张3天的C2C12上清液。干预时间分别为7天和21天，每次干预结束后提取细胞RNA以及蛋白。Real-time PCR检测LIFR以及成骨基因：ALP、Runx2和OPN的表达；Western blot检测ALP、Runx2、LIFR、STAT3和P-STAT3的蛋白表达；ALP和茜素红染色观察MC3T3-E1的成骨分化情况；免疫荧光观察Runx2和LIFR在MC3T3-E1中的表达。<br>　　研究结果：<br>　　1. 机械牵张对C2C12成肌因子分泌的影响:<br>　　Real-time PCR结果显示：与对照组相比，牵张3天促进了C2C12成肌标志因子LIFR、Myod1、Csrp3和Mog的表达（Plt;0.05）。Western blot结果显示：与对照组相比牵张3天的C2C12上清液中LIFR蛋白表达显著上调（Plt;0.01）。<br>　　2. C2C12上清液干预MC3T3-E1的影响:<br>　　ALP染色结果显示：牵张3天的C2C12上清液使MC3T3-E1中ALP分泌显著上调（ Plt;0.05 ）。茜素红染色结果显示牵张 3 天的 C2C12 上清液干预使MC3T3-E1 21天成骨分化后钙结节明显增多，经Image J处理统计其钙化结节阳性面积显著增加（Plt;0.05）。Real-time PCR结果显示：干预结束后，3天上清液干预组MC3T3-E1的成骨相关基因：Runx2、ALP和OPN mRNA水平显著上调（Plt;0.05），LIFR表达也显著增多（Plt;0.05）。Western blot结果显示：使用牵张3天的C2C12上清液干预能够促进MC3T3-E1成骨蛋白ALP、Runx2的表达（Plt;0.05），LIFR的表达也出现升高（Plt;0.05），STAT3磷酸化蛋白表达显著升高（Plt;0.01）。免疫荧光结果显示LIFR和Runx2在3天C2C12上清液干预组的MC3T3-E1细胞中表达增加（Plt;0.05）。<br>　　研究结论：<br>　　机械牵张能够促进成肌细胞系分泌成肌因子LIFR，牵张后的C2C12上清液干预可以提高成骨细胞系LIFR的表达，上调相关成骨因子的表达，进而促进成骨分化。