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磁性碳纳米管对RNA的保护及其在新冠病毒检测中的应用

摘要2020年,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的新冠肺炎(Coronavirus Disease2019,COVID-19)疫情席卷全球,造成累计6.7亿病例的感染。SARS-CoV-2是一种遗传物质为RNA的病毒,因此,在新冠病毒样本采集和检测过程中,长时、长距离的运输和样本处理不当等问题使得病毒核酸样本极易降解,这会对检测结果造成影响进而导致假阴性的问题,对疫情的防控工作和社会公共健康产生危害。<br>  单壁碳纳米管(Single-Wall Carbon Nanotubes,SCNTs)作为一种有着高比表面积的纳米材料,能够以π-π相互作用迅速将核酸单链吸附到碳纳米管上。本研究首先从碳纳米管的保护作用时间、保护作用温度以及与不同RNase抑制剂效果比较等方面对SCNTs的保护作用进行全面的挖掘,证明SCNTs在室温的保护条件下能实现对大肠杆菌总RNA96h的保护,其保护效果可以与商业售卖的RNase抑制剂相同,并且相较于商业售卖的RNase抑制剂SCNTs在室温条件下就可实现长期储存。扫描电镜(Scanning Electron Microscope,SEM)和反转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)的方法被用于对SCNTs吸附RNase和RNA的原理进行的初步阐释,证明SCNTs对RNA的保护能力是由于SCNTs同时对RNA和RNase吸附,阻断二者的接触来实现的。<br>  碳纳米管因其分散性较难回收,本研究又基于磁性固相分离技术构建了磁性碳纳米管(Magnetic Single-wall Carbon Nanotubes,MSCNTs),建立了一种可同时实现对RNA保护和核酸富集的提取新方法。构建MSCNTs后,本研究还使用了傅里叶红外分光光谱分析、Zeta电位分析、马尔文粒度分析的方法对MSCNTs的表面修饰进行了表征。选用了200mM的HCl对MSCNTs进行质子化,并且对1mL的样本储存液进行模拟样本提取方法的构建。最后,经RT-qPCR和反转录环介导等温扩增(Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification,RT-qLAMP)检测方法证明,确定了MSCNTs在RT-qPCR和RT-LAMP中对核酸扩增反应不产生抑制作用的最佳使用量分别为1μg和20μg,且MSCNTs的使用可分别将RT-qPCR和RT-LAMP的最低检测限降低8-10倍和50倍。整个方法的建立节约了提取操作的时间,增强了样本运输过程中的稳定性,提高了针对病毒的检测灵敏度还有效地减少假阴性结果的出现。

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