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摘要研究背景及目的：<br>　　巨噬细胞是体内重要的免疫细胞，主要功能为抵抗病原体入侵和通过与其他免疫细胞的相互作用调节体内免疫平衡，巨噬细胞可塑性强，根据不同的微环境，可极化为不同的表型，主要的表型有两种，即M1型和M2型，M1型巨噬细胞主要为促炎作用，而M2型巨噬细胞的主要作用为抑制炎症促进修复。在炎症的早期阶段，局部巨噬细胞主要为M1型，通过分泌一些炎性细胞因子，同时和其他免疫细胞发生相互作用，促进炎症的发生发展；而在炎症末期，一些感染物基本被清除后，M1型巨噬细胞则转换为M2型巨噬细胞，分泌一些促修复因子，同时吸引一些参与修复的细胞，如成纤维细胞和血管内皮细胞，有利于局部组织的修复，巨噬细胞从M1型转换为M2型是从炎症阶段转向修复阶段的关键。在一些慢性炎症性疾病当中，如糖尿病足溃疡、压疮和静脉性溃疡，由于各种因素的影响，炎症局部中的M1型巨噬细胞无法转换为M2型巨噬细胞，不能进入修复阶段，表现为持续的炎症。<br>　　光动力疗法（Photodynamic Therapy，PDT）是一种新兴的治疗手段，通过局部光敏剂给药，然后运用与光敏剂相匹配波长的光照射靶组织，发生光化学反应，产生光生物学效应。ALA-PDT（5-Aminolevulinic Acid Photodynamic Therapy）是临床上较为常用且技术较为成熟的一种光动力疗法，本课题组在前期研究中发现，大剂量的ALA-PDT可促进巨噬细胞极化为M1表型，但低剂量ALA-PDT对巨噬细胞的作用尚不明确。一些研究发现，采用小剂量的光敏剂的光动力治疗有激活氧化应激、促进增殖的作用，但具体机制尚未明确。为探讨低剂量ALA-PDT对M1型巨噬细胞的极性转换作用及其机制，特设计本实验。<br>　　实验方法：<br>　　（1）LPS诱导巨噬细胞为M1表型<br>　　（2）研究不同光照强度的低剂量ALA-PDT对M1型巨噬细胞活性和M1型标志物iNOS的影响，选定参数条件<br>　　（3）研究低剂量ALA-PDT对M1型巨噬细胞M1型和M2型标志物的影响<br>　　（4）研究低剂量ALA-PDT对M1型巨噬细胞处理后自噬相关蛋白的表达<br>　　（5）研究低剂量ALA-PDT对M1型巨噬细胞处理后HO-1和NQO1的表达<br>　　（6）研究低剂量ALA-PDT对M1型巨噬细胞处理后自噬相关蛋白和HO-1的相互作用<br>　　实验结果：<br>　　（1）100ng/ml的LPS刺激RAW264.7细胞24小时，成功诱导M1型巨噬细胞；（2）在孵育低剂量（0.1mmol/L）ALA的条件下，随着光照强度的增强，M1型巨<br>　　噬细胞活性逐渐下降，在光照强度为2J/cm2及以上水平时，M1型标志物iNOS表达降低；<br>　　（3）在本实验所设置的低剂量ALA-PDT治疗参数下，M1型标志物iNOS、IL-1?和IL-6表达降低，而M2型标志物Arg-1和IL-10表达升高；<br>　　（4）M1型巨噬细胞经低剂量ALA-PDT处理后，PDT组Beclin1的表达较M1组、ALA组和红光组表达升高，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ在PDT组中显著增高，而P62在PDT组中则明显降低；<br>　　（5）使用自噬抑制剂3MA对PDT组中的自噬进行抑制后，iNOS的表达显著升高；<br>　　（6）M1型巨噬细胞经低剂量ALA-PDT处理后，PDT组HO-1和NQO1的表达较M1组、ALA组和红光组表达升高；<br>　　（7）使用HO-1抑制剂Znpp对PDT组中的HO-1进行抑制后，iNOS的表达显著升高；<br>　　（8）使用自噬抑制剂3MA对PDT组中的自噬进行抑制后，HO-1的表达降低。<br>　　结论：<br>　　（1）LPS可诱导RAW264.7细胞为M1型巨噬细胞。<br>　　（2）低剂量ALA-PDT可使M1型巨噬细胞转换为M2型巨噬细胞。<br>　　（3）自噬和HO-1介导低剂量ALA-PDT对M1型巨噬细胞的极性转换作用。