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摘要目的本研究通过对比血清外泌体miRNAs在非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)患者与健康对照者之间,以及在NSCLC的肺腺癌(lungadenocarcinoma,LUAD)患者与肺鳞状细胞癌(lungsquamous-cellcarcinoma,LUSC)患者之间表达水平的差异,筛选出可以用于NSCLC早期诊断,以及LUAD和LUSC鉴别诊断的血清外泌体miRNAs,从而发掘有利于NSCLC临床研究的生物标志物.<br>　　方法选取2020年7月~2022年6月青岛大学附属医院接收的47例经病理组织切片检查确诊为NSCLC患者(26例LUAD和21例肺LUSC)和47例同期来进行健康体检的健康对照者作为研究对象.①从TCGA数据库下载两套miRNAs表达谱数据和相应临床数据,利用R语言的Limma包,对NSCLC组和健康对照组以及LUAD组和LUSC组miRNAs表达数据进行差异分析,筛选出差异表达的miRNAs各5个.②运用超速离心法分离NSCLC患者与健康对照者的血清外泌体,使用透射电镜(transmissionelectronmicroscope,TEM)观察外泌体的外观形态.③采用蛋白质印迹法(Westernblot)检测外泌体标志性表面蛋白分子CD9和CD63.④实时荧光定量PCR(realtimequantitativePCR,RT-qPCR)分析TCGA数据库选出的10个miRNAs,从中初筛出NSCLC组和健康对照组以及LUAD组和LUSC组差异显著的血清外泌体miRNAs各3个;⑤将筛选出来的差异显著的6个血清外泌体miRNAs作为检验对象,在纳入研究的所有受试者中展开验证,通过RT-qPCR定量检测,进一步验证选出的血清外泌体miRNAs准确性.⑥将验证的6个血清外泌体miRNAs分别做受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,判断其对NSCLC诊断和区分LUAD和LUSC的价值.<br>　　结果①对TCGA数据库下载的NSCLC患者与健康对照者比较,观察到306个差异表达的miRNAs,其中上调表达的miRNAs118个,下调表达的miRNAs188个,筛选出差异表达显著的5个miRNAs,分别是miR-1269a、miR-6788-3p、miR-210-3p、miR-31-5p和miR-4732-3p(|log2FC|gt;1,Plt;0.05);对LUAD患者和LUSC患者比较,观察到77个miRNAs既在LUAD中表达上调又在LUSC中表达上调,83个miRNAs既在LUAD中表达下调又在LUSC中表达下调,筛选出在两组同时上调或下调且差异表达显著的5个miRNAs,分别是miR-205-5p(↑)、miR-147b(↑)、miR-210-3p(↑)、miR-1269a(↑)和miR-139-3p(↓)(|log2FC|gt;1,Plt;0.05).②透射电镜(TEM)观察外泌体外观形态为不规则椭圆形,其外缘可观察到膜结构.③采用Westernblot检测外泌体膜表面标志性蛋白分子CD9和CD63,发现CD9和CD63均为阳性,说明收集到的样本为外泌体.④通过RT-qPCR定量分析,初筛NSCLC患者和健康对照者的血清外泌体miRNAs,发现5个miRNAs中有3个miRNAs差异有统计学意义,分别是miR-1269a、miR-6788-3p和miR-4732-3p(Plt;0.05),而miR-210-3p和miR-31-5p差异无显著意义;初筛LUAD患者和LUSC患者的血清外泌体miRNAs,表达量差异显著的为miR-205-5p、miR-147b和miR-139-3p(Plt;0.05),而miR-210-3p和miR-1269a无显著差异.⑤所有样本RT-qPCR定量分析结果验证,血清外泌体miR-1269a、miR-6788-3p和miR-4732-3p在NSCLC患者和健康对照者中的表达差异显著(Plt;0.05);血清外泌体miR-205-5p、miR-147b和miR-139-3p在LUAD患者和LUSC患者中的表达差异显著(Plt;0.05),两组结果均与初筛结果一致.⑥通过计算两组血清外泌体miRNAsROC曲线下面积AUC发现,外泌体miR-1269a对NSCLC诊断的曲线下面积AUC=0.942,95%CI为0.894~0.990;外泌体miR-4732-3p对NSCLC诊断的曲线下面积AUC=0.888,95%CI为0.825~0.951;外泌体miR-205-5p对LUAD与LUSC鉴别诊断的曲线下面积AUC=0.914,95%CI为0.837~0.990.<br>　　结论①通过外泌体的提取和鉴定,验证了NSCLC患者与健康对照者的外泌体miRNAs存在差异表达.②血清外泌体miR-1269a和miR-4732-3p可以作为NSCLC早期诊断的潜在生物标志物.③血清外泌体miR-205-5p可以作为LUAD和LUSC鉴别诊断的潜在生物标志物.