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摘要目的：<br>　　TRIM45（Tripartitemotif-containingprotein45）作为TRIM家族成员，是一个含有RING（ReallyInterestingNewGene）结构域的E3泛素连接酶，对癌症发挥抑制作用。SQSTM1/p62作为一个肿瘤预后生物标志物，可与凋亡、自噬、氧化应激等过程中的关键分子相互作用，影响肿瘤的进展。本研究旨在探究TRIM45通过靶向p62调控Nrf2/Keap1信号通路，从而抑制乳腺癌细胞恶性行为的作用及机制。<br>　　方法：<br>　　1.通过生物信息学对TRIM45基因与乳腺癌发生进行相关性预测。从GEO数据库中筛选女性乳腺癌基因集，根据GSE5364和GSE3744数据库中TRIM45基因在乳腺癌及邻近正常组织中的表达情况绘制箱线图，评估TRIM45基因在临床乳腺癌组织中的表达差异。通过UCSC网站在TCGA数据库中筛选女性乳腺癌的临床生存数据，探究TRIM45基因对乳腺癌患者生存及预后的影响，及TRIM45与临床病理的相关性分析。<br>　　2.使用TRIM45质粒及空载质粒建立TRIM45过表达组与空载对照组乳腺癌细胞株。通过CCK-8和EdU实验探索TRIM45过表达对乳腺癌细胞增殖的影响。Transwell及Woundhealing实验探究TRIM45对乳腺癌细胞横向及纵向迁移的影响。通过WesternBlot实验探究TRIM45对增殖迁移相关蛋白（N-cadherin，E-cadherin，Vimentin，MMP2，MMP9，VEGF及IGF-1，IGF-1R）表达的影响。<br>　　3.通过IP实验探索TRIM45过表达组的乳腺癌细胞裂解液中TRIM45是否与p62结合，通过CHXchase试验和蛋白酶体抑制剂（MG132）处理，探索TRIM45对p62降解的作用机制。<br>　　4.通过WesternBlot实验探究在乳腺癌细胞中TRIM45对p62，Keap1和Nrf2蛋白表达的影响，进而探索TRIM45对乳腺癌细胞发挥抑制作用的机制。<br>　　5.提取TRIM45过表达组及空载对照组的乳腺癌细胞裂解液，对谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathioneperoxidase，GSH-PX），谷胱甘肽（Glutathione，GSH）和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量进行检测，探究TRIM45基因对乳腺癌细胞氧化应激的影响。<br>　　结果：<br>　　1.通过生物信息学方法发现，TRIM45在女性乳腺癌组织中的表达低于邻近正常组织。数据库筛选的女性乳腺癌的临床生存数据表明，TRIM45高表达可显著提高乳腺癌患者的生存率，而TRIM45低表达乳腺癌患者预后较差。TRIM45的表达高低与乳腺癌临床病理具有相关性。<br>　　2.CCK-8检测结果表明，TRIM45过表达组的MCF-7以及BT549细胞中增殖细胞数较空载对照组少。EdU结果表明，TRIM45过表达组的荧光数量和强度明显低于空载对照组，且增殖相关基因IGF-1及其受体IGF-1R表达下调，证实TRIM45可抑制乳腺癌细胞的增殖。Transwell和Woundhealing实验结果表明，TRIM45过表达组细胞迁移能力下降。<br>　　3.TRIM45抑制乳腺癌的上皮间充质转化（Epithelialmesenchymaltransformation，EMT）及迁移相关蛋白的表达。此外，与空载对照组相比，细胞外基质降解的重要酶类及血管生成相关因子——MMP2、MMP9和VEGF在TRIM45过表达组中表达量也下调。<br>　　4.IP实验发现TRIM45可与p62结合，TRIM45过表达组p62表达明显下调，而MG132可使TRIM45过表达组p62表达发生逆转。与空载组相比，TRIM45过表达的MCF-7和BT549细胞中p62的半衰期缩短。<br>　　5.在TRIM45表达量相关的乳腺癌样本中分析差异基因，使用GSEA富集分析发现，差异基因富集在氧化应激及Nrf2信号通路。在TCGA乳腺癌数据库中按照TRIM45表达量高低，对p62，Keap1，Nrf2对进行相关性分析，p62、Keap1和Nrf2的表达量变化有统计学差异。进一步检测与p62相互作用的Nrf2和Keap1的表达发现，过表达TRIM45会降低Nrf2的表达，增加Keap1的表达。<br>　　6.与空载对照组相比，TRIM45过表达组GSH-PX活性降低，MDA含量升高，GSH含量下降。这些结果表明，TRIM45破坏了乳腺癌细胞的抗氧化应激机制，可通过激活氧化应激来诱导癌细胞死亡。<br>　　结论：<br>　　1.与正常组织相比，TRIM45的表达在乳腺癌中较正常组织降低，并与临床患者生存期呈正相关。<br>　　2.在表型上，TRIM45可抑制乳腺癌的增殖和迁移，并抑制EMT相关蛋白及迁移相关蛋白的表达。<br>　　3.在机制上，证实TRIM45可通过与p62相互作用，降低p62的表达，进而破坏Keap1/Nrf2的相互制衡作用，使其在癌细胞抗氧化应激方面发挥的保护作用遭到破坏，从而抑制乳腺癌的发展。