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摘要目的：<br>　　肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension，PAH）是一种进行性的肺血管疾病，其主要的病理特征是肺血管重构（pulmonary vascular remodeling，PVR）。PVR的发生是由于多种因素的相互作用导致的，其中包括内皮-间充质转化（endothelial-to-mesenchymal transition，EndoMT）。胡桃醌是从核桃中分离出来的一种天然化合物，也是脯氨酰顺反异构酶 1（Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase NIMA-interacting 1， 1）的天然抑制剂。已有研究认为胡桃醌可以减弱 PAH 的进展。然而，其具体作用机制，特别是以EndoMT为药理学靶点的问题还有待进一步探索。本研究主要观察Pin1及其抑制剂胡桃醌对PAH疾病中血管 EndoMT 的影响，并探讨其可能的作用机制。<br>　　方法：<br>　　通过野百合碱（monocrotaline，MCT）建立PAH模型。将30只Sprague-Dawley （SD）雄性大鼠平均分为3组（n=10）：正常对照组，MCT组，胡桃醌组。胡桃醌组于 MCT 干预 2 周后，每天给予胡桃醌腹腔内注射。4 周后，检测右心肥厚指数（right ventricular hypertrophy index，RVHI）及右心室收缩压（right ventricular systolic pressure，RVSP）；苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色及马松（Masson）染色观察大鼠肺血管管壁厚度及胶原蛋白沉积；免疫荧光染色测定肺动脉壁中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）和血管性血友病因子（von Willebrand Factor，vWF）的表达；蛋白印迹法（Western blot）检测肺组织相关蛋白的表达水平。<br>　　进行人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）的体外培养，暴露于缺氧环境（1% O2、5% CO2和 94% N2）中，建立低氧模型。通过小干扰RNA（siRNA）靶向Pin1（siPin1）减少HUVECs中Pin1的表达。细胞进行干预后，显微镜下观察各组细胞形态的变化；免疫荧光染色检测细胞 α-SMA 和 vWF的表达；伤口愈合实验和 Transwell实验测定 HUVECs的迁移；Western blot检测各组细胞中vWF、血管内皮钙粘蛋白（VE-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、α-SMA、Pin1、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶 1/2（phospho-extracellular regulated protein kinases1/2，p-ERK1/2）和磷酸化 p38 丝裂原活化蛋白激酶（phospho-p38 mitogen-activated protein kinases，p-p38）等相关蛋白的表达水平。<br>　　结果：<br>　　与对照组相比较，MCT组大鼠体重降低［（273.00±39.12）g比（408.90±17.63） g，q=15.774，P＜0.05］；RVSP及RVHI升高［（39.66±5.26）mmHg、（44.02±5.47）%比（18.71±1.72）mmHg、（22.96±3.50）%，q=17.255、16.126，P＜0.05］；肺动脉管壁增厚，管腔狭窄，中膜厚度百分比（vascular wall thickness，WT）%及中膜面积百分比（vascular wall area，WA）%值明显升高［（83.64±7.56）%、（90.56±7.02）%比（41.10±10.59）%、（52.78±7.71）%，q=9.801、7.338，P＜0.01］；肺小血管周围胶原蛋白明显沉积［（15.89±5.10）%比（3.88±0.67）%，q=6.880，P＜0.01］；内皮层vWF表达减弱，α-SMA为表达加强，出现vWF和α-SMA的双阳性染色；肺组织中vWF， VE-cadherin表达降低（0.60±0.03、0.43±0.25比1.13±0.04、1.58±0.33，q=5.187、7.198， P＜0.05），Vimentin、α-SMA、Pin1、p-ERK1/2、和p-p38表达升高（1.20±0.08、0.93±0.09、1.02±0.03、1.24±0.41、1.58±0.29 比 0.72±0.07、0.44±0.09、0.45±0.18、0.52±0.10、0.61±0.31，q=9.318、8.814、7.160、5.015、5.182，P＜0.05）。与MCT组相比较，胡桃醌明显升高 PAH 大鼠体重［（346.30±16.12）g 比（273.00±39.12）g，q=8.320， P＜0.05］，有效降低RVSP及RVHI［（23.16±3.29）mmHg、（34.03±2.04）%比（39.66±5.26） mmHg、（44.02±5.47）%，q=13.289、7.480，P＜0.05］；使得管壁明显变薄，管腔狭窄显减轻， WT%及 WA%值恢复正常［（ 45.78±0.50 ）%、（ 61.98±11.39 ）%比（83.64±7.56）%、（90.56±7.02）%，q=8.724、5.550，P＜0.05］；肺小血管周围胶原蛋白的沉积得以改善［（7.38±0.97）%比（15.89±5.10）%，q=4.875，P＜0.01］；内皮层vWF表达增强，α-SMA表达减弱，双阳性染色细胞明显减少；促进肺组织vWF， VE-cadherin蛋白表达（1.07±0.30、1.15±0.25比1.15±0.25、0.43±0.25，q=4.593、4.484， P＜0.05），抑制Vimentin、α-SMA、Pin1、p-ERK1/2、和p-p38蛋白表达（0.86±0.12、0.58±0.11、0.53±0.15、0.37±0.09、0.68±0.37 比 1.20±0.08、0.93±0.09、1.02±0.03、1.24±0.41、1.58±0.29，q=6.534、6.271、6.237、6.037、4.773，P＜0.05）。<br>　　体外实验中，与对照组相比较，缺氧诱导使得HUVECs细胞形态由鹅卵石状转变为梭形成纤维细胞样形态；出现vWF和α-SMA的双阳性染色；vWF，VE-cadherin表达减弱（0.38±0.02、0.43±0.18比0.58±0.04、0.89±0.16，q=3.772、6.010，P＜0.05）， Vimentin、α-SMA、Pin1、p-ERK1/2、和 p-p38 表达加强（0.94±0.12、0.97±0.16、0.99±0.06、1.30±0.30、1.36±0.33 比 0.45±0.22、0.56±0.07、0.70±0.05、0.69±0.19、0.56±0.12，q=4.926、5.622、5.139、4.930、6.037，P＜0.05）。伤口愈合实验和Transwell测定细胞迁移能力也明显增强［（79.58±2.18）%、359.67±39.37比（37.46±2.90）%、60.67±17.21，q=8.516、16.590，P＜0.05］。siPin1对缺氧刺激HUVECs中Pin1的沉默可以恢复细胞形态为鹅卵石样；同时逆转缺氧导致 vWF，VE-cadherin 的降低（0.90±0.16、0.79±0.03比0.38±0.02、0.43±0.18，q=9.772、4.606，P＜0.05），Vimentin、α-SMA、Pin1、p-ERK1/2、和p-p38的升高（0.54±0.12、0.57±0.15、0.62±0.04、0.34±0.22、0.39±0.31比0.94±0.12、0.97±0.16、0.99±0.06、1.30±0.30、1.36±0.33，q=4.046、5.475、6.579、7.680、7.323，P＜0.05）。抑制HUVECs迁移［（61.11±4.96）%、96.00±38.97比（79.58±2.18）%、359.67±39.37，q=3.735、14.63，P＜0.05］。<br>　　结论：<br>　　EndoMT发生在MCT诱导的PAH大鼠肺动脉和缺氧HUVECs中。胡桃醌通过抑制Pin1进而抑制EndoMT减轻内皮功能障碍和PVR，从而缓解了PAH。进一步发现Pin1抑制剂胡桃醌或siPin1可能通过抑制Pin1进而抑制ERK1/2和p38的磷酸化从而部分逆转EndoMT进展。研究结果为PAH的进一步治疗提供了新的思路，表明EndoMT是治疗PAH的一个有趣的药物靶点，胡桃醌可能被用于PAH的治疗。