摘要目的:制作PLGA支架/水凝胶复合支架前体,共培养诱导分化获得髓核样尿源干细胞(NP-USCs),结合尿源干细胞外泌体(USC-EXOs),构建复合支架。结合兔椎间盘退变模型,通过体内及体外实验研究复合支架是否能改善椎间盘退变。<br> 方法:3Dmax设计高精度PLGA支架并打印,利用扫描电子显微镜(SEM)观察支架的微观结构,利用红外光谱和拉曼光谱表征PLGA支架材料的成分;使用模拟体液(SBF)测定支架的溶胀率,无水乙醇测定支架的孔隙率,采用多种生物酶和SBF进行体外模拟降解实验;通过三系分化实验和流式细胞术鉴定尿源干细胞(USCs)的干细胞特性,通过诱导USCs分化为髓核样共培养获得NP-USCs;CCK8用于检测USC-EXOs的促增殖能力,Calcein/PI染色检测复合支架的细胞相容性。CT引导穿刺兔L5-6获得腰椎退变模型,在穿刺前、穿刺1月后及植入复合支架1月后分别进行核磁共振MRI检查,观察腰椎退变情况,每次麻醉后均抽血送检兔肝肾功能,表征支架生物相容性;MRI检查后处死家兔取出椎间盘组织,研磨获得蛋白质样品,Westernblot测量COL-Ⅱ和ACAN蛋白质含量变化。<br> 结果:PLGA支架形态为多腔隙结构,比表面积大,利于细胞生长,支架上凹陷有利于干细胞迁移;PLGA支架溶胀率低,不会在体内发生较大形变,高孔隙率为细胞提供良好的增殖环境,高抗降解特性表明支架能长时间提供足够的抗压能力维持结构稳定。USCs三系分化均诱导成功,流式细胞术鉴定干细胞标志蛋白CD29(99.105)、CD44(98.85%)、CD73(94.27%)表明USCs具有类似于间充质干细胞MSCs的特性。USC-EXOs有促进细胞增殖的能力,复合支架细胞相容性好。复合支架较为明显地改善了兔腰椎间盘退变,其生物相容性好。相较于穿刺组,移植组COL-Ⅱ和ACAN蛋白含量明显增加,但仍较正常组有明显差距。<br> 结论:复合支架通过NP-USCs分泌COL-Ⅱ和ACAN达到改善椎间盘退变的效果。NP-USCs既具有干细胞的大量增殖能力又能发挥类似髓核细胞功能。USC-EXOs能促进NP-USCs在体内及体外增殖。
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