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白藜芦醇在烟曲霉菌角膜炎中的作用与机制

摘要目的:研究白藜芦醇对烟曲霉菌角膜炎的抗真菌、抗炎和神经保护作用。<br>  方法:1.采用细胞毒性试验和Draize眼表毒性试验评估不同浓度的白藜芦醇对永生化的人角膜上皮细胞(HCECs)的毒性;2.通过最小抑制浓度、扫描或透射电子显微镜、碘化丙啶吸收试验和Calcofluorwhite染色评估白藜芦醇的抗真菌作用;3.建立小鼠真菌性角膜炎模型,分别给予0.8mM的白藜芦醇、12μM那他霉素和0.1%DMSO点眼处理。感染后第1、3、5天通过裂隙灯观察角膜炎症情况,进行临床评分并拍照,在第3天处死小鼠,进行HE染色、平板菌落计数和MPO检测白藜芦醇对角膜组织炎症细胞浸润和真菌负荷的影响;4.通过qRT-PCR、Westernblot和ELISA检测感染后第3天和第5天角膜中p38MAPK蛋白磷酸化以及炎症因子IL-1β、IL-6和模式识别受体Dectin-1的mRNA和蛋白水平的表达情况;5.用白藜芦醇预处理HCECs2小时,加入灭活的烟曲霉菌菌丝刺激后收集细胞,通过qRT-PCR、Westernblot和ELISA检测p38MAPK的磷酸化水平以及炎症因子IL-1β、IL-6和模式识别受体Dectin-1的mRNA和蛋白水平;6.HCECs用白藜芦醇预处理2小时,加入Dectin-1特异性激动剂Curdlan刺激后收集细胞,用qRT-PCR、Westernblot和ELISA检测p38MAPK磷酸化情况以及炎症因子IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白水平表达情况;7.使用免疫荧光染色、qRT-PCR和VonFrey试验来评估白藜芦醇的神经保护作用。<br>  结果:1.白藜芦醇浓度≤100μM时对HCECs无细胞毒性,白藜芦醇在浓度为0.2mM和0.8mM是对小鼠角膜无毒性;2.白藜芦醇抑制了烟曲霉菌丝的生长并改变了体外菌丝的形态;3.0.8mM的白藜芦醇治疗降低了小鼠的烟曲霉菌性角膜炎感染第3天的临床评分,减轻角膜炎的严重程度,白藜芦醇还减少了炎症细胞浸润,降低了中性粒细胞活性和真菌负荷;4.白藜芦醇降低了烟曲霉菌感染小鼠角膜中Dectin-1、IL-1β、IL-6表达以及灭活的烟曲霉菌菌丝刺激的HCECs中IL-1β、IL-6以及模式识别受体Dectin-1的表达,同时白藜芦醇降低了真菌感染小鼠角膜中和HCECs中p38MAPK通路的磷酸化激活水平。白藜芦醇预处理降低了Dectin-1特异性激动剂Curdlan刺激的HCECs中p38MAPK磷酸化水平以及炎症因子IL-1βIL-6的表达;5.白藜芦醇增加感染角膜上皮下神经纤维密度,下调机械敏感阈值,并增加CGRP和TRPV-1的表达。<br>  结论:白藜芦醇能够抑制烟曲霉菌生长,破坏烟曲霉菌形态,还可以减轻烟曲霉菌性角膜炎的小鼠角膜组织中中性粒细胞浸润,降低真菌负荷,从而在角膜炎中发挥保护作用,同时白藜芦醇下调炎症因子以及模式识别受体的表达,抑制促炎通路p38MAPK磷酸化,并且白藜芦醇是通过抑制Dectin-1/p38MAPK通路来发挥其抗炎作用,白藜芦醇还对烟曲霉菌角膜炎中小鼠角膜具有神经保护作用。

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导师 赵桂秋
分类号 R772.21
发布时间 2023-12-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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