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摘要目的：设计合成多种热休克蛋白90（Heatshockprotein90，Hsp90）单靶点抑制剂以及Hsp90与组蛋白去乙酰化酶6（Histonedeacetylase6，HDAC6）双靶点抑制剂，并初步验证其抗肿瘤以及抑制特发性肺纤维化（Idiopathicpulmonaryfibrosis，IPF）的活性。<br>　　1、新型热休克蛋白90抑制剂的设计合成与活性评价。<br>　　方法：本课题化合物的设计基于具有强效Hsp90抑制活性的Hsp90抑制剂VER-50589，通过晶体结构分析及结构修饰，合理设计了三个Hsp90抑制剂12-4、12-8、12-9；通过查阅文献，设计了一条合理的合成路线，顺利得到三个目标化合物；体外酶活测试了三个化合物对Hsp90的抑制活性；四甲基偶氮唑蓝（Methylthiazolyltetrazolium，MTT）法检测了三个化合物对A549（非小细胞肺癌）、95-D（人高转移肺癌细胞）、MCF-7（乳腺癌细胞）、MDA-MB-231（乳腺癌细胞）、Hela（宫颈癌细胞）、ES-2（人卵巢癌细胞）细胞系的抗增殖活性；用平板克隆实验进一步验证了化合物12-4的体外抗增殖活性；用流式细胞术检测细胞周期探索化合物12-4对A549细胞的抗增殖机制；采用AnnexinV-异硫氰酸荧光素/7-氨基放线菌素D（AnnexinV-Fluoresceinisothiocyanate/7-AminoactinomycinD，AnnexinV-FITC/7-AAD）双染色法检测了化合物12-4诱导A549肿瘤细胞凋亡的能力；用划痕实验测试化合物12-4对A549细胞迁移的影响；免疫印迹（Westernblot）检测化合物12-4对Hsp90客户蛋白细胞周期依赖性激酶4（Cellcycledependentkinase4，CDK4）和人类表皮生长因子受体2（Humanepidermalgrowthfactorreceptor2，HER2）表达的影响；分子对接预测了化合物12-4与Hsp90的结合模式。<br>　　结果：化合物12-4对Hsp90表现极强的抑制活性，半抑制浓度（Halfmaximalinhibitoryconcentration，IC50）为9纳摩尔（Nanomole，nM）；化合物12-4对6种实体瘤细胞都展现了极强的增殖抑制活性，IC50值均在纳摩尔级别，且均优于两个阳性对照药VER-50589和格尔德霉素（Geldanamycin，GA）；平板克隆形成实验表明化合物12-4抑制A549细胞集落形成的作用较强；化合物12-4能够诱导肿瘤细胞的凋亡，并将肿瘤细胞周期阻滞于G0/G1期，符合Hsp90抑制剂的主要特征；化合物12-4在3nM下能够明显抑制A549细胞的迁移；Westernblot实验结果表明，12-4能够显著降低Hsp90客户蛋白CKD4、HER2的表达；分子对接模拟实验表明，化合物12-4能够契合Hsp90的活性位点，形成多个氢键相互作用。<br>　　结论：化合物12-4在酶活、体外抗肿瘤细胞增殖实验、平板克隆形成实验以及划痕实验等多个生物活性实验中优于阳性对照药，整体来看，化合物12-4作为新型Hsp90抑制剂具有广泛的应用前景。<br>　　2、新型Hsp90与HDAC6双靶点抑制剂的设计合成以及活性评价。<br>　　方法：通过将第二代Hsp90抑制剂的活性关键基团（Activekeygroup，Cap）、异羟肟酸（Hydroxamicacid，ZBG）以及不同结构的连接链（Linker）进行结构融合，设计并合成了一系列17个新型Hsp90与HDAC6双靶点抑制剂。体外酶活测试了所有目标化合物对Hsp90与HDAC6两个靶标的抑制活性；MTT法检测了所合成化合物对多种肿瘤细胞：A549、Huh-7（人肝癌细胞）、HepG2（人肝癌细胞）、MDA-MB-231、Hela以及SKOV3（人卵巢癌细胞）和HFL-1（人胚肺成纤维细胞）的抗增殖作用。<br>　　结果：17个化合物对两个靶标均有较好的抑制活性；化合物13-1和化合物13-3的抗肿瘤增殖活性明显优于阳性对照药伏立诺他（Vorinostat，SAHA）和30f（报道的Hsp90抑制剂），且对所测试的肿瘤细胞都具有纳摩尔级别的抗增殖活性；化合物13-1抑制HFL-1细胞增殖的IC50为3.42微摩尔（Micromole，μM），活性远高于上市对照药尼达尼布（Nintedanib）（IC50=30.41μM）和吡非尼酮（Pirfenidone）（IC50=5000μM）。<br>　　结论：化合物13-1在体外抗增殖实验中表现出较为强大的抑制作用。