摘要目的:<br> 研究胍丁胺酶(Agmatinase,AGMAT)在胃癌组织及细胞中的表达情况,并分析AGMAT的表达水平与胃癌患者临床病理特征的相关性。之后选择适合的胃癌细胞系,通过完善细胞表型实验,验证其在胃癌细胞中发挥的作用。<br> 方法:<br> 通过在线数据库GEPIA分析AGMAT在胃癌组织中的表达水平。通过Kaplan-Meierplotter数据库分析AGMAT的表达水平与胃癌患者生存期的相关性。通过免疫组织化学技术,我们研究了青岛市市立医院33例胃癌患者的胃癌组织和癌旁正常粘膜组织样品中AGMAT的表达水平,并分析了这33例胃癌患者的AGMAT表达水平与临床病理特征的相关性。利用qRT-PCR技术检测胃癌细胞系(HGC-27、SGC-7901及SNU-1)和胃粘膜上皮细胞(GES-1)中AGMATmRNA的表达水平。通过使用AGMATsiRNA转染SGC-7901细胞,采用CCK8实验、Transwell实验、平板克隆实验、Wasternblot实验检测干扰AGMAT对胃癌细胞增殖、侵袭、凋亡变化及对通道相关蛋白的作用。<br> 结果:<br> GEPIA数据库显示相对于正常组织(n=211),胃癌组织(n=408)中AGMAT表达水平升高(P<0.05)。Kaplan-Meierplotter数据库的研究结果显示,AGMAT的高表达会导致胃癌组织的整体预后显著下降(P=1.4e-11)。免疫组织化学结果显示AGAMT主要表达在胃癌细胞胞浆中。其中胃癌组织中AGMAT染色阳性率为90.90%(30/33),正常粘膜组织中AGMAT的阳性率为39.40%(13/33)。卡方检验分析发现胃癌组织中AGMAT表达水平与TNM分期(P=0.006)、淋巴结转移(P=0.019)相关,但与患者年龄(P=0.143)、性别(P=0.909)、肿瘤大小(P=0.392)、分化程度(P=0.509)、浸润深度(P=0.658)无明显相关性。qRT-PCR实验显示,在胃癌细胞中,AGMAT的mRNA表达水平明显高于胃粘膜上皮细胞GES-1,其中SGC-7901胃癌细胞系的表达水平最高(P<0.01)。通过AGMATsiRNA转染,对其进行细胞表型实验验证。CCK8实验、Transwell实验、平板克隆实验证明,敲低AGMAT后的SGC-7901细胞较对照组细胞增殖能力下降,迁移能力下降。在敲低AGMAT之后,细胞侵袭相关蛋白MMP2、MMP7,细胞凋亡相关蛋白Caspase3、p53、BCL-2、Bax,细胞周期相关蛋白P27、cyclinD1和EMT相关蛋白Vimentin的表达下降,而细胞周期相关蛋白CDK4和EMT相关蛋白N-cadherin的表达升高。<br> 结论:<br> AGMAT在胃癌组织中的表达相较于癌旁组织升高,其表达与胃癌患者的TNM分期及淋巴结转移相关,并对患者预后产生影响。AGMAT可能通过影响细胞增殖、迁移相关蛋白的表达,促进胃癌细胞增殖和侵袭。
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