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摘要目的：探究异硫氰酸苄酯（Benzylisothiocyanate，BITC）对烟曲霉菌的抗菌机制和在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中治疗作用。<br>　　方法：通过CCK-8实验检测永生化人角膜上皮细胞（humancornealepithelialcells，HCECs）、小鼠巨噬细胞（RAW264.7）细胞活性及Draize眼毒性试验获得BITC体内及体外验安全浓度。在体外，采用最低抑菌浓度法、钙荧光白染色法、时间—杀菌曲线评估BITC对烟曲霉菌的抑菌活性；通过碘化丙啶摄取法、活性氧（ROS）检测试剂盒、黏附实验和结晶紫染色法检测BITC对烟曲霉菌细胞膜完整性的破坏、烟曲霉菌细胞内ROS积累量、对烟曲霉菌孢子粘附抑制作用以及对真菌生物膜破坏情况。建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型，使用BITC或者DMSO结膜下注射处理小鼠角膜，分别在感染后第3天和第5天在裂隙灯下观察、拍照并进行临床评分，通过临床评分和平板计数评估BITC对小鼠烟曲霉菌性角膜炎的疗效。对感染后第3天和第5天角膜进行苏木精-伊红（HE）染色评价BITC对炎症细胞浸润的影响；通过髓过氧化物酶（MPO）试剂盒对小鼠感染后3天角膜的中性粒细胞进行定量。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、WesternBlot和ELISA评估感染后第3天和第5天角膜中IL-1β、TNF-α、IL-6以及Mincle的mRNA和蛋白表达情况。BITC预处理2小时后，加入灭活的烟曲霉菌菌丝刺激RAW264.7细胞，用qRT-PCR、ELISA和WesternBlot分别检测烟曲霉菌刺激8小时、24小时后IL-1β、TNF-α、IL-6和Mincle的mRNA和蛋白表达情况。使用BITC预处理2小时，随后加入Trehalose-6,6-dibehenate（TDB）刺激RAW264.7细胞，通过qRT-PCR和ELISA分别检测刺激8小时、24小时后IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白水平表达情况，WesternBlot和免疫荧光检测TDB刺激24小时后的Mincle蛋白的表达水平。<br>　　结果：<br>　　1.0-100μg/mLBITC对HCECs的细胞活性无影响，0-6μg/mLBITC对RAW264.7的细胞活性无影响；Draize眼毒性试验结果显示浓度为400μg/mLBITC对小鼠角膜无毒性。<br>　　2.在体外实验中，BITC在25μg/mL以上具有抗真菌作用，对烟曲霉菌的抗菌作用具有浓度和时间依赖性。BITC损伤烟曲霉菌细胞膜完整性、线粒体形态及功能，抑制烟曲霉菌对HCECs黏附作用以及破坏生物膜。<br>　　3.在小鼠真菌性角膜炎模型中，与DMSO相比，200μg/mLBITC处理组临床评分显著降低，感染角膜的真菌负荷明显减少，角膜中的炎症细胞浸润和中性粒细胞数量明显减少。qRT-PCR、WesternBlot和ELISA实验结果表明，BITC组感染角膜中的炎症因子IL-1β、TNF-α及IL-6以及模式识别受体Mincle的mRNA及蛋白表达较DMSO处理组显著减少。<br>　　4.qRT-PCR、WesternBlot、ELISA以及免疫荧光实验结果表明，在灭活菌丝或TDB刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞，3μg/mLBITC显著下调了Mincle以及IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA及蛋白表达。<br>　　结论：BITC能破坏烟曲霉菌的细胞膜、线粒体、真菌粘附和生物膜的形成，对烟曲霉菌具有杀菌活性。BITC改善了烟曲霉菌性角膜炎的炎症评分，减少了感染角膜的真菌负荷，减少了角膜中炎性细胞的浸润和促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平，在烟曲霉菌性角膜炎中发挥保护作用。BITC可能通过下调模式识别受体Mincle来发挥抗炎作用。