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外周血Th22细胞与2型糖尿病合并肺结核的相关性研究

摘要目的探讨2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)合并肺结核(pulmonarytuberculosis,PTB)患者外周血Th22细胞比率及相关生物学特征的变化;同时体外观察患者血清诱导及外源性白细胞介素-22(interleukin-22,IL-22)对THP-1巨噬细胞功能的影响,为T2DM合并PTB疾病的临床研究提供实验参考依据。<br>  方法选取2019年5月-2020年4月在临沂市人民医院入院的113例患者,根据临床诊断分为三组:2型糖尿病合并肺结核组(T2DM-PTB组)患者36例、单纯肺结核组(PTB组)患者38例、单纯2型糖尿病组(T2DM组)患者39例。同时选择35例体检正常人作为对照组。研究方法如下:①通过流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测各组样本外周血中Th22细胞比率。②通过应用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)分别测定各组样本血清中IL-22的水平变化。③通过实时荧光定量PCR(real-timefluorescentquantitativePCR,RT-qPCR)技术检测各组临床样本外周血Th22细胞中Runt相关转录因子1(runt-relatedtranscriptionfactor1,Runx1)、芳香烃受体(arylhydrocarbonreceptor,AHR)、C-肌腱膜纤维肉瘤原癌基因转录因子(c-musculoaponeuroticfibrosarcoma,C-Maf)mRNA表达水平。④通过FCM测定各组样本外周血Th22细胞中PD-1+和CD57+细胞比率。⑤通过RT-qPCR测定各组血清诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1(ATPbindingcassetteA1,ABCA1)以及β-防御素(β-defensin)mRNA的表达变化。使用软件SPSS22.0进行统计学分析,使用均数±标准差(x±s)表示计量结果,两两之间采用LSD-t检验进行统计分析,P<0.05有统计学意义。医院伦理与学术委员会审核批准此项研究,研究对象知晓此项研究相关研究过程,已签署知情同意书。<br>  结果①各组患者Th22细胞比率比较,T2DM-PTB组显著高于对照组(P<0.001)、PTB组(P<0.05)和T2DM组(P<0.001),差异具有统计学意义;PTB组和T2DM组高于对照组(P<0.001,P<0.05),差异具有统计学意义;PTB组高于T2DM组(P<0.001),差异具有统计学意义。②各组患者IL-22水平比较,T2DM-PTB组低于对照组(P<0.001)、PTB组(P<0.001)和T2DM组(P<0.001),差异具有统计学意义;PTB组和T2DM组均低于对照组(P<0.001,P<0.001),差异具有统计学意义;PTB组高于T2DM组(P<0.01),差异具有统计学意义。③与对照组相比,Th22细胞中AHRmRNA的表达在T2DM-PTB组、PTB组和T2DM组均下调(P<0.05,P<0.05,P<0.05),差异有统计学意义;与PTB组和T2DM组相比,T2DM-PTB组Th22细胞中AHRmRNA表达也显著下调(P<0.05,P<0.05),差异有统计学意义;但PTB组和T2DM组之间,Th22细胞中AHRmRNA表达无显著性差异(P>0.05)。④与对照组相比,Th22细胞中C-MafmRNA的表达在T2DM-PTB组、PTB组和T2DM组显著上调(P<0.001,P<0.05,P<0.05),差异具有统计学意义;与PTB组和T2DM组相比,T2DM-PTB组Th22细胞中C-MafmRNA表达也显著上调(P<0.01,P<0.01),差异具有统计学意义;但PTB组和T2DM组之间Th22细胞中C-MafmRNA表达无显著性差异(P>0.05)。⑤Th22细胞中Runx1mRNA的表达在各组间并没有显著性差异(P>0.05)。⑥与对照组相比,T2DM-PTB组、PTB组和T2DM组在Th22细胞中PD-1+和CD57+细胞的比率显著增加(P<0.001,P<0.001,P<0.001),差异具有统计学意义;与PTB组、T2DM组相比,T2DM-PTB组Th22细胞中PD-1+和CD57+细胞的比率显著增加(P<0.001,P<0.001),差异具有统计学意义;T2DM组和PTB组比较,T2DM组Th22细胞中PD-1+和CD57+细胞的比率显著增加(P<0.001),差异具有统计学意义。⑦T2DM-PTB组血清诱导THP-1巨噬细胞中ABCA1mRNA的表达较对照组、PTB组、T2DM组均下调(P<0.001,P<0.05,P<0.05),差异具有统计学意义;PTB组和T2DM组中ABCA1mRNA的表达较对照组均下调(P<0.01,P<0.01),差异具有统计学意义;PTB组和T2DM组间ABCA1mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。⑧T2DM-PTB组血清诱导THP-1巨噬细胞中β-defensinmRNA的表达较对照组、PTB组、T2DM组均下调(P<0.001,P<0.001,P<0.01),差异具有统计学意义;T2DM组中β-defensinmRNA的表达低于对照组(P<0.01),差异具有统计学意义;PTB组中β-defensinmRNA的表达低于对照组而高于T2DM组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。⑨T2DM-PTB组加入外源性IL-22后,血清诱导THP-1巨噬细胞中ABCA1mRNA和β-defensinmRNA表达较Ctrl组显著上调(P<0.001,P<0.001),差异具有统计学意义。<br>  结论①Th22细胞及其细胞因子IL-22的紊乱可能与T2DM合并PTB疾病的发生发展密切相关。②T2DM合并PTB患者中的Th22细胞显示出明显的衰老、耗竭表型,同时IL-22表达依赖的转录因子下调,IL-22水平降低,最终导致了巨噬细胞的外排功能和杀菌功能受损。

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