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摘要研究目的：<br>　　川芎嗪（Tetramethylpyrazine，TMP）对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导的急性肺损伤小鼠的改善作用及miR-194-5p在其中发挥的作用及机制。<br>　　研究方法：<br>　　采用“二次打击”建立急性肺损伤小鼠模型，健康的C57/BL6小鼠被随机分组。模型组小鼠第一次腹腔注射LPS，16h后第二次气管内滴注LPS诱导ALI模型；TMP组和阳性对照地塞米松组（dexamethasone，Dex）小鼠在腹腔注射LPS前30min及气管滴注LPS后30min时，通过腹腔注射不同剂量的TMP和Dex；敲除及过表达miR-194-5p组小鼠在建模前一周气管滴注敲除及过表达miR-194-5p的腺病毒进行转染。小鼠外周血氧饱和度（peripheral blood oxygen saturation，SpO2）在气管滴注LPS24h后进行检测；取肺组织计算湿重与干重比率（W/D）；小鼠血清中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）由ELISA试剂盒测定；实时荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR，qPCR）检测小鼠肺组织中IL-1β、IL-6及TNF-α的表达；HE染色用来观察肺组织的病理学变化；免疫组织化学染色（Immunohistochemistry，IHC）检测MPO、p-Rac1、p-LIMK1的表达；Western blot检测Rac1、LIMK1蛋白在肺组织中的表达，并检测紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin的表达；检测支气管肺泡灌洗液中白细胞总数和蛋白浓度含量；Evans Blue检测肺毛细血管的渗漏；TUNEL检测小鼠肺组织的细胞凋亡。<br>　　研究结果：<br>　　（1）TMP可以抑制Rac1/LIMK1信号通路的激活来改善LPS诱导的ALI小鼠肺毛细血管内皮细胞的高通透性和肺部炎症<br>　　用LPS处理C57/BL6小鼠，发现LPS能诱导小鼠肺部炎症和肺水肿，且p-Rac1、p-LIMK1蛋白在肺组织中表达增加，Rac1/LIMK1信号通路被激活，TMP处理能逆转上述改变。通过ELISA、qPCR、HE染色、Evans Blue、肺组织湿/干比、免疫组织化学染色、Western blot等实验，证实TMP可以抑制Rac1/LIMK1信号通路的活化来降低肺毛细血管内皮细胞通透性和肺部炎症。<br>　　（2）miR-194-5p在TMP改善小鼠ALI中发挥重要作用<br>　　双荧光素酶实验报告证实Rac1是miR-194-5p的靶基因，为了进一步研究miR-194-5p是否在TMP抑制Rac1/LIMK1信号通路过程中发挥作用，在ALI小鼠给予TMP干预的前一周分别转染敲除miR-194-5p和过表达miR-194-5p的腺病毒。通过Western Blot、支气管肺泡灌洗液检测、Evans Blue等实验，发现过表达miR-194-5p可以降低p-Rac1、p-LIMK1的表达及增加紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达从而抑制构架重组和紧密连接受损，改善ALI小鼠的肺毛细血管内皮的高通透性。基于TMP和敲除miR-194-5p两种处理的ALI小鼠与只用TMP处理的小鼠相比，敲除miR-194-5p可部分阻断TMP对LPS诱导的急性肺损伤的保护作用，说明miR-194-5p介导了TMP改善LPS诱导的ALI小鼠的肺毛细血管内皮细胞通透性和炎症。<br>　　研究结论：<br>　　（1）Rac1/LIMK1/ZO-1/occludin通路活化导致肺毛细血管内皮细胞骨架重组和紧密连接受损，TMP通过抑制Rac1/LIMK1/ZO-1/occludin信号通路的激活改善LPS诱导的小鼠ALI内皮细胞骨架重组和通透性增加。<br>　　（2）过表达miR-194-5p通过靶向Rac1抑制Rac1/LIMK1/ZO-1/occludin通路活性改善LPS诱导的小鼠急性肺损伤。<br>　　（3）TMP改善LPS诱导的C57/BL6小鼠的急性肺损伤，其作用之一可能是通过miR-194-5p/Rac1/LIMK1通路实现的。