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摘要目的：<br>　　系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种系统性自身免疫性疾病，浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cell，pDC）内体中的Toll 受体（Toll-like receptor，TLR）7/9-干扰素（interferon，IFN）信号通路在其发病机制中占据重要地位，但调节机制不清。微小 RNAs （ microRNAs ， miRNAs ）可在生物体液中循环并可被外泌体（ exosome ）等囊泡包裹，参与SLE 发生。本研究目的是通过测序对 SLE 与健康人血清外泌体中 miRNAs 表达谱进行分析，得到差异表达的 miRNAs，结合生物信息学分析技术预测差异表达基因的作用靶点，寻找与 TLR7/9-IFN 信号通路密切相关的外泌体 miRNAs，为SLE的早期诊断及治疗提供可行的新策略。<br>　　方法：<br>　　1. 选取 3 例首次诊断的女性 S L E 患者及 3 例年龄相匹配的健康女性，留取空腹外周静脉血，采用外泌体分离试剂盒获取血清外泌体，通过电子显微镜观察所得外泌体的形态特征、nanosight 分析外泌体直径和数量、蛋白质印迹法测定外泌体特异性标志物检验分离质量后，抽提外泌体RNA行二代测序。测序数据在经过长度筛选、比对过滤、miRBase 数据库比对注释和新 miRNA 预测等前期处理后获得在多个SLE 患者中一致上调或下调的特征 miRNAs 集合。同时对该集合成员进行靶基预测、基因本体论（Gene Ontology，GO）和京都基因与百科基因全书（Kyoto gene Encyclopedia，KEGG）分析，选择能激活 TLR7/9信号转导的 miRNAs。<br>　　2. 选取符合纳入与排除标准的 26 例女性 SLE 患者和 26 例健康女性作为研究对象，收集研究对象的流行病学特征、临床特征及实验室检查等资料，并获取血清样本。利用实时荧光定量 PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）法验证已命名的 miRNAs表达水平，酶联免疫吸附法检测血清 IFN-α1（IFNA1）表达水平。<br>　　3. 分析特异性外泌体 miRNAs 表达水平与 SLE 临床病理特征的关系，受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）分析特异性外泌体 miRNAs诊断 SLE的价值。<br>　　结果：<br>　　1. 抽提所得外泌体呈茶托样结构，大小均匀，平均粒径、蛋白质含量、单位体积外泌体的蛋白质含量及单位质量蛋白内的外泌体数量在 SLE 与健康对照组间无显著差异，外泌体标记物 Alix、CD9 和 TSG101 均有表达，外泌体分离效果良好。<br>　　2. 与健康对照组比较， SLE 组共筛选出 16 个与 TLR7/9 通路关键信号级联分子密切相关的有显著表达差异的血清外泌体 miRNAs，其中表达上调的外泌体miRNAs 有 5 个（ hsa-miR-1228-5p、hsa-miR-128-1-5p、novel768_mature、novel1744_mature、novel39_mature＞novel456_mature），其余外泌体 miRNAs 表达下调（ hsa-miR-1268a、hsa-miR-1908-5p、hsa-miR-6799-5p、novel279_mature、novel331_mature＞novel938_mature、novel337_mature、novel379_mature、novel698_mature、novel713_mature、novel839_mature、novel403_mature）。<br>　　3. RT-qPCR 结果显示，与健康对照组相比， SLE 组血清外泌体中 hsa-miR-1228-5p 相对表达量显著上调，与测序结果一致；而 hsa-miR-1268a 表达水平上调，与测序结果相反，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。<br>　　4. SLE患者血清外泌体中 hsa-miR-1228-5p的表达水平与 SLE疾病活动度评分（ SLE disease activity index-2000 ， SLEDAI-2000 ）呈正相关（ P＜0.05 ）。hsa-miR-1228-5p和 hsa-miR-1268a的表达水平呈正相关（ P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　1. SLE 患者和健康人血清外泌体 miRNAs 谱存在差异性表达，推测其可能通过 TLR7/9-IFN信号通路参与了 SLE的发病机制。<br>　　2. 外泌体 hsa-miR-1228-5p和 hsa-miR-1268a有望成为早期诊断 SLE的生物标志物之一。