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Circ0000798通过调节miR-665/HOXB5信号轴促进肾癌增殖与转移

摘要研究目的:肾细胞癌 (renal cell carcinoma, RCC)是一种常见的泌尿系统肿瘤。随着影像学技术的发展, RCC的检出率不断提高。然而尽管诊疗手段取得了重大的进展, RCC患者的预后依旧很差。环状RNA (circular RNA, circRNA)是一类不具有编码蛋白质功能的非编码 RNA。越来越多的证据表明, circRNA在多种恶性肿瘤包括RCC中表达失调。因此,本研究旨在探索一种新的circRNA,circ0000798在RCC中的作用机制,为今后设计治疗RCC的生物靶向药物提供新思路和理论基础。<br>  研究方法:应用 RNA微阵列分析鉴定RCC组织中过度表达的circRNA;通过RT-PCR检测RCC组织和细胞系中circ0000798的表达水平;构建敲低表达或过表达circ0000798、miR-665、HOXB5的载体并转染至 RCC细胞;通过 CCK-8实验检测RCC细胞的增殖情况;分别通过划痕试验及transwell实验检测RCC细胞的迁移能力与侵袭性;通过ELISA法检测RCC细胞的凋亡情况;通过western blotting分析RCC细胞中 MMP-2/-9、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、caspase-3、cleaved caspase-3、HOXB5等蛋白的表达水平;利用生物信息学工具识别 circ0000798的下游靶基因;通过双荧光素酶报告基因实验验证circ0000798与miR-665及miR-665与HOXB5之间的相互作用。<br>  研究结果:CircRNA微阵列分析发现在RCC组织中circ0000798显著高表达,随后的研究发现在 RCC组织和细胞系中 circ0000798表达同样显著上调。沉默circ0000798水平通过抑制MMP-2/-9、N-cadherin、Vimentin、caspase-3蛋白表达和促进E-cadherin、cleaved caspase-3蛋白表达抑制RCC细胞的增殖、迁移和侵袭,并且促进细胞的凋亡。进一步研究表明, circ0000798通过直接靶向miR-665作为海绵体发挥生物学作用,抑制miR-665可逆转沉默circ0000798对RCC细胞凋亡、迁移及侵袭的影响。同时, miR-665可对HOXB5进行负调控。<br>  研究结论:由此可见, circ0000798发挥癌基因的功能,可以通过充当 miR-665的海绵,间接增加下游靶基因HOXB5的表达,从而促进RCC的增殖、转移并抑制其凋亡。这些结果为 circ0000798作为RCC潜在的诊断生物标记物以及治疗靶点提供理论依据。

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