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摘要目的：人类乳头瘤病毒（HPV）是世界上最常见的性传播病原体之一。HPV 疫苗是防治宫颈癌的有效手段。但传统的肌肉注射模式依然存在 HPV 疫苗递送效率低下的问题。肠道免疫可以靶向肿瘤特异性表面抗原以外的细胞内抗原，引发新的肿瘤特异性 T 细胞反应，达到肿瘤全身性消退、长效免疫的效果，具有独特优势。口服肿瘤疫苗能够在具有人体最大免疫器官的肠道激活，发挥更强的免疫疗效，且刺激机体产生的特殊抗体IgA防范作用更广，这正是注射类疫苗所缺乏的。但胃酸破坏及肠道蠕动排除作用等构建的胃肠道生理屏障限制了口服类疫苗实现肿瘤的全身性消退以及延长患者生存期的效果。本研究利用羧甲基壳聚糖水凝胶联合益生菌（枯草芽孢杆菌）包载 HPV 疫苗，克服胃肠道生理屏障，提高 HPV 对免疫细胞的抗原提呈效果，并研究其预防小鼠宫颈癌的机制。<br>　　方法：选择 HPV16 E7 疫苗为研究对象，体外构建 pHT43-HPV16 E7 质粒，转染入枯草芽孢杆菌中，利用 MSgg 培养基诱导枯草芽孢杆菌产生生物膜，并利用阳性聚合物 PAH 对其进行修饰，完成益生菌包载 HPV 疫苗（SCBS-E7）的构建；以羧甲基壳聚糖络合钙离子构建水凝胶，作为转化后枯草芽孢杆菌的支架。最后将工程枯草芽孢杆菌均匀分布于羧甲基壳聚糖水凝胶中，完成口服疫苗（SCBS-E7@CMC）的构建；通过蛋白印迹实验，酶联免疫吸附实验对 SCBS-E7 进行表征；利用扫描电镜、透射电镜、Zeta 电位、原子力显微镜对 SCBS-E7 进行表征，验证枯草芽孢杆菌生物膜的产生以及电位的改变；完成傅里叶变换红外光谱、扫描电镜表征，通过抗菌面积、释放率、细菌活力测定等实验，对 SCBS-E7@CMC中枯草芽孢杆菌保护效率表征；小鼠灌胃口服SCBS-E7@CMC，利用革兰氏染色验证SCBS-E7@CMC在肠道的黏附；通过活死染色实验和工程菌在人工胃液与人工肠液中的存活状态等检测 SCBS-E7@CMC对抗胃肠道极端环境的能力；构建小鼠宫颈癌模型，通过酶联免疫吸附实验、Hamp;E、Tunel染色、血液生化指标等评价SCBS-E7@CMC对肿瘤的免疫效果及安全性。<br>　　结果：（1）构建了口服 HPV 疫苗（SCBS-E7）。成功将 pHT43-HPV16 E7质粒转入枯草芽孢杆菌，并在IPTG的诱导下表达HPV16 E7蛋白。成功利用MSgg培养基诱导枯草芽孢杆菌产生生物膜，提高口服疫苗在肠道的黏附效率，与对照组相比有显著差异（P＜0.05）。<br>　　（2）羧甲基壳聚糖水凝胶（CMC）成功包载 HPV 疫苗，构建了耐酸水凝胶联合益生菌递送 HPV疫苗体系（SCBS-E7@CMC）。口服SCBS-E7@CMC 后，该体系可以有效对抗胃酸环境，提高内含菌生存率，与对照组相比差异显著（P＜0.05）。并在抵达肠道后 1 h 内迅速释放80%的内含菌，能够满足口服疫苗在肠道迅速释放的要求。<br>　　（3）HPV疫苗递送体系成功在小鼠体内诱导特异性抗体。对小鼠SCBS-E7@CMC灌胃后第21天检测到血清中特异性IgG抗体水平显著升高（P＜0.05）。对荷瘤小鼠进行口服免疫，能有效抑制小鼠肿瘤生长，抗肿瘤治疗效果与对照组有显著差异（P＜0.05），且未观察到明显的器官损伤及炎性反应，具有良好的生物安全性。<br>　　结论：耐酸水凝胶联合益生菌载药体系可作为 HPV 疫苗的有效载体，克服胃肠道的生理屏障，显著提高疫苗的肠道给药效率，实现 HPV 疫苗在肠道的免疫构建，并抑制宫颈癌的发生。该载药体系为其他疫苗肠道输送效率及高效免疫提供了新策略。