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摘要目的 构建基于吉西他滨（GEM）的纳米制剂，通过抑制核糖核苷酸还原酶M2亚基(RRM2)的表达，从而克服胰腺癌耐药细胞（PANC-1/GEM）对GEM的耐药性，提高治疗效果。<br>　　方法：<br>　　课题一：诱导M0型巨噬细胞分化为M1型，提取外泌体（M1Exo）合成M1Exo-GEM-DFX NPs。在该纳米制剂中，地拉罗斯（DFX）通过消耗铁离子来抑制RRM2的过表达，<br>　　从而提高GEM的化学敏感性。我们并分别通过动态光散射（DLS）分析M1Exo-GEM-DFX NPs的粒径大小；透射电镜（TEM）评估其形态特征；Zeta电位仪测试其表面电位。在体外细胞活性评价中，我们对M1Exo-GEM-DFX NPs进行了细胞毒性实验、除铁离子效果评价、多耐药性研究、伤口愈合实验、细胞黏附实验、蛋白质印记分析，以此来评价M1Exo-GEM-DFX NPs对GEM耐药性的抑制效果。最后，建立3D肿瘤球模型来模拟体内肿瘤微环境，用M1Exo、GEM、DFX、GEMamp;DFX和M1Exo-GEM-DFX NPs分别对3D肿瘤球连续处理7天，并分析各组的体积和圆率，评价M1Exo-DFX-GEM NPs对肿瘤球的抑制效果。<br>　　课题二：对GEM和Triapine进行药物组合研究，选择最佳的药物联用摩尔比R(GEM:Triapine）。在确定了R为111.5后，按照比例合成CaCO3-GEM-Triapine NPs后,通过DLS分析其粒径大小；TEM评估其形态特征；Zeta电位仪测试其表面电位；释放实验测其释放曲线。在体外细胞活性评价中，我们对CaCO3-GEM-Triapine NPs进行了细胞毒性实验、多耐药性研究、细胞迁移实验、蛋白质印记分析，以此来评价CaCO3-GEM-Triapine NPs对GEM敏感性的提升效果。最后，用3D肿瘤模型对CaCO3-GEM-Triapine NPs的药效进行进一步的评价。<br>　　结果：<br>　　课题一：（ 1 ）成功合成了 M1Exo-DFX-GEM NPs。在体外表征中， M1Exo-GEM-DFX NPs的尺寸为 150.9 ± 1.1 nm；电位为-34.30±3.25 m；载药率为6.5±2.3%（GEM）、5.7±1.4%（DFX）。（2）在体外细胞活性分析与蛋白表达情况研究中，M1Exo-DFX-GEM NPs可以有效的抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移并诱导RRM2下调从而有效抑制PANC-1/GEM细胞对GEM的化学敏感性。（3）在3D肿瘤球实验中，与其他游离药物组相比，M1Exo-DFX-GEM NPs组处理的肿瘤球的体积和圆率均最小，肿瘤球的外围更容易破碎成不规则形状。<br>　　课题二：（1）根据R的比例成功合成了CaCO3-GEM-Triapine NPs。在体外表征中，CaCO3-GEM-Triapine NPs的尺寸为 128.8 ±7.1 nm；电位为-5.46 ± 1.98 mV；GEM 和 Triapine 的药物包封效率分别约为 82%和 76%。在CaCO3-GEM-Triapine NPs的释放实验中，从释放的总体趋势来看， GEM和Triapine在pH 5.7时的释放量显著大于pH 7.4时的释放量。这种现象表明CaCO3-GEM-Triapine NPs具有一定的pH响应性。（2）在体外细胞活性分析与蛋白表达情况研究中，CaCO3-GEM-Triapine NPs对PANC-1和PANC-1/GEM细胞的细胞毒性最大，可以有效抑制PANC-1/GEM细胞的迁移，抑制RRM2的过表达，降低GEM的化疗耐药性，显著提高治疗效果。（3）在3D肿瘤球实验中， CaCO3-GEM-Triapine NPs组处理的肿瘤球更容易死亡和破碎。<br>　　结论 我们成功合成了M1Exo-GEM-DFX NPs和CaCO3-GEM-Triapine NPs。M1Exo-GEM-DFX NPs和CaCO3-GEM-Triapine NPs均呈现出规则的球形形貌，并且粒径小、分布窄。此外，M1Exo-GEM-DFX NPs和CaCO3-GEM-Triapine NPs均可有效抑制PANC-1/GEM肿瘤球的形成和生长，其作用机制主要是诱导RRM2下调，进而抑制PANC-1/GEM细胞的DNA的损伤修复和复制，增强对GEM的敏感性。