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摘要目的：通过纳米氧化镍（NiO NPs）建立两个实验模型，即大鼠肺纤维化模型和A549细胞胶原沉积模型，深入探讨长链非编码RNA MEG3（lncRNA MEG3）、Hedgehog（Hh）通路和自噬在纳米氧化镍诱导的肺纤维化中的作用及其分子机制。<br>　　方法：1.体内实验：取健康成年雄性Wistar大鼠，随机分为四组，包括对照组和不同浓度的纳米氧化镍染毒组（0.015、0.06、0.24 mg/kg），染毒方法采用气管内滴注，染毒时间为9周，染毒频率为2次/周，建立大鼠肺纤维化模型进行后续实验。（1）利用 RT-qPCR 对大鼠肺组织中 LncRNA MEG3 的表达水平进行评估。（2）利用 RT-qPCR 和 Western Blot 分别对大鼠肺组织 Hh 信号通路相关基因和蛋白（Shh、Ptch1、Smo、Gli1）、自噬标志物相关基因和蛋白（Beclin 1、P62、LC3BI、LC3BⅡ）的表达水平进行评估。2.体外实验：（1）用 25、50和100μg/mL纳米氧化镍处理A549细胞24小时建立胶原沉积模型。（2）将A549细胞分别用100nM的自噬激活剂（Rapamycin）和10μM的Hh信号通路抑制剂（GDC-0449）预处理 1 小时后，再将其用 50μg/mL 纳米氧化镍联合 100nM Rapamycin 或 10μM GDC-0449 处理 24 小时。（3）将三种类型的 A549 细胞，包括正常A549细胞、过表达MEG3（LV-MEG3）的A549细胞以及空载质粒（LV-NC）的A549细胞，分别用50μg/mL纳米氧化镍处理24小时，收集细胞样品，进行后续相关指标检测。利用RT-qPCR对LncRNA MEG3的表达水平进行评估，利用RT-qPCR 和Western Blot 分别对 Hh 信号通路相关基因和蛋白（Shh、Ptch1、Smo、Gli1）、自噬标志物相关基因和蛋白（Beclin 1、P62、LC3BI、LC3BⅡ）及Col-I的蛋白表达水平进行评估。<br>　　结果：1.体内实验：（1）纳米氧化镍对大鼠肺组织MEG3和Hh信号通路的影响：与对照组相比，LncRNA MEG3 的表达水平在纳米氧化镍组大鼠肺组织中降低（P＜0.05）。Shh、Ptch1、Smo和Gli1的mRNA和蛋白表达水平在0.24 mg/kg纳米氧化镍组大鼠肺组织中均高于对照组（P＜0.05），提示 NiO NPs 可激活大鼠肺组织 Hh 信号通路。（2）纳米氧化镍对大鼠肺组织细胞自噬的影响：0.06 和 0.24mg/kg 纳米氧化镍组大鼠肺组织 Beclin 1 和 LC3B 的 mRNA 和蛋白表达水平及LC3BⅡ/I比值相比对照组呈下降趋势，而0.015、0.06和0.24mg/kg纳米氧化镍组大鼠肺组织P62的蛋白表达水平相比对照组呈上升趋势（P＜0.05），提示纳米氧化镍可抑制大鼠肺组织细胞的自噬活性。2.体外实验：（1）纳米氧化镍对A549细胞MEG3、Hh信号通路和自噬的影响：25、50和100μg/mL纳米氧化镍组 A549 细胞 LncRNA MEG3 的表达水平低于对照组（P＜0.05）。Shh、Ptch1、Smo和Gli1的mRNA和蛋白表达水平在50μg/mL纳米氧化镍组细胞中均高于对照组（P＜0.05），提示50μg/mL纳米氧化镍可激活A549细胞的Hh信号通路。A549 细胞用 50 和 100μg/mL纳米氧化镍处理后，Beclin 1 和 LC3BⅡ的mRNA和蛋白表达水平以及LC3BⅡ/I比值相比对照组均有减少，而P62蛋白水平相比对照组均有增加（P＜0.05），提示50和100μg/mL纳米氧化镍可抑制A549细胞的自噬活性。（2）细胞自噬在纳米氧化镍诱导的 A549 细胞胶原形成中的作用：Col-I的蛋白表达水平在50μg/mL纳米氧化镍组A549细胞中高于对照组，而 Col-I 的蛋白表达水平在纳米氧化镍+Rapamycin 组细胞中低于纳米氧化镍组（P＜0.05），表明增强自噬活性可阻抑纳米氧化镍诱导的A549细胞胶原过量形成。（3）Hh信号通路在纳米氧化镍诱导的A549细胞自噬和胶原形成中的作用：50μg/mL 纳米氧化镍组细胞中 Col-I 的蛋白水平高于对照组，而纳米氧化镍+GDC-0449组Col-I的蛋白水平低于纳米氧化镍组（P＜0.05），表明抑制Hh信号通路可以减弱纳米氧化镍诱导的 A549 细胞胶原过量形成。Beclin 1 和 LC3BⅡ蛋白表达水平及 LC3BⅡ/I 比值在纳米氧化镍组细胞中相比对照组均有减少，而P62蛋白水平相比对照组均有增加（P＜0.05）；纳米氧化镍+GDC-0449组细胞中Beclin 1和LC3BⅡ蛋白表达水平及LC3BⅡ/I比值相比纳米氧化镍组相均有增加，而P62蛋白水平均有降低（P＜0.05），表明抑制Hh信号通路后，可以增强纳米氧化镍引起的A549细胞自噬活性的降低。（4）MEG3介导的Hh通路和自噬在纳米氧化镍诱导的A549细胞胶原形成中的作用：50μg/mL纳米氧化镍组和纳米氧化镍+LV-NC组细胞Col-I的蛋白水平高于对照组，而纳米氧化镍+LV-MEG3组细胞中Col-I的蛋白水平低于纳米氧化镍组（P＜0.05）。纳米氧化镍组和纳米氧化镍+LV-NC 组细胞中Shh、Ptch1、Smo和 Gli1 的蛋白表达水平相比对照组均升高，而纳米氧化镍+LV-MEG3组细胞中Shh、Ptch1、Smo和Gli1的蛋白表达水平相比纳米氧化镍组均降低（P＜0.05）。结果表明，MEG3可抑制纳米氧化镍激活的A549细胞Hh信号通路，进而减少细胞胶原过量形成。与对照组相比，纳米氧化镍组和纳米氧化镍+LV-NC 组细胞中 Beclin 1、LC3BⅡ 的蛋白水平及LC3BⅡ/I比值在均呈下降趋势，而P62的蛋白水平呈上升趋势（P＜0.05）。纳米氧化镍+LV-MEG3 组细胞中 Beclin 1、LC3BⅡ 的蛋白水平及 LC3BⅡ/I 比值均高于纳米氧化镍组，而 P62 蛋白水平低于纳米氧化镍组（P＜0.05）。结果表明， MEG3可减轻纳米氧化镍诱导的A549细胞自噬活性的降低，进而抑制A549细胞胶原过量形成。<br>　　结论：纳米氧化镍可诱导大鼠肺组织纤维化，其分子机制与 NiO NPs 诱导肺组织lncRNA MEG3表达下调而激活Hh信号通路，进而抑制细胞自噬活性有关。