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摘要乙型流感病毒（InfluenzaBVirus，IBV）是一种呼吸道病原体，季节性IBV会引起不同程度的流行病，每年在全球范围内对健康造成严重的影响，是导致老人和儿童死亡的重要原因。目前，流感疫苗接种是预防和控制流感流行的最有效措施。研究表明，流感病毒在传播过程中，病毒表面包膜糖蛋白血凝素（HA）持续发生突变，使流感病毒能够逃避人体内的免疫识别。因此，需要每年接种疫苗并更新疫苗组分。本研究旨在筛选MDCK（MadinDarbyCanineKidney）悬浮细胞中传代稳定且复制能力高的IBV毒株作为疫苗骨架株，为季节性流感疫苗的研发提供技术支撑。具体实验内容如下：<br>　　首先将B/Phuket/3073/2013、B/Maryland/15/2016、B/Brisbane/9/2014、B/Darwin/7/2019、B/Singapore/INFTT-16-0610/2016五株IBV在MDCK悬浮细胞中进行适应性传代，通过血凝检测和CCID50检测比较五种流感病毒毒株的血凝滴度、病毒滴度和传代稳定性，经评价B/Singapore/INFTT-16-0610/2016病毒传代稳定性最优，病毒滴度较高。同时利用空斑法检测病毒滴度，对上述结果进行验证，结论相符。电镜结果表明，毒株在传代过程中形态未发生改变且病毒粒子数量增多。将筛选出的高产毒株免疫小鼠，通过免疫血清抗体检测初步评价高产毒株在小鼠体内的免疫原性。<br>　　其次将获得高产毒株B/Singapore/INFTT-16-0610/2016的骨架片段PA、PB1、PB2、NP、NS、M和B/Phuket/3073/2013的HA、NA片段构建感染性克隆质粒，通过转染实验成功获得重组IBV。<br>　　综上所述，我们成功筛选出高产且传代性稳定的IBV疫苗骨架株，在动物实验中证实该病毒具有显著的免疫原性。并通过反向遗传操作技术，成功拯救重组IBV。筛选的B/Singapore/INFTT-16-0610/2016骨架株可能为MDCK细胞基质流感疫苗的研发和生产奠定基础。